1樓：但山禹醉山
一。引物設計和樣品使用均是一樣的情況，就是反應條件的問題。
二。反應條件就看你的實驗操作和所使用的儀器，操作都一樣的話，儀器設定上出問題的可能性會大一些，其中退貨溫度是比較關鍵的。
三。人品問題也會導致這樣的情況。
四。一般減少引物二聚體。的方法：
從引物自身著手，重新賀廳舉設計引物，這是最根本解決這一問題的辦法；
可能模板有問題；
模板濃度過小，適當加大模板量；
taq酶，引物，mg2
濃度可能過高，可降低它們的濃度；
取你所要加的上下游引物混合後，在100攝氏度。
下的沸水中煮5分鐘，然後迅速拿出至於冰塊之上瞬時冷卻，這時再加入反應體系當中，引物二聚體就會消失的；
所配mix中加5%的甘油。
或者5%的dmso，可以增強特異性。
pcr反應體系的配製在冰上進行，最後加taq酶，pcr結束後，產物勿放置在室溫下過長時間，有人認為室溫下有些taq酶會將多餘的引物合成為二聚體；
增加迴圈數；
降低退火溫度。
後有條帶，則應逐漸提高溫度，若提高溫度的同時產物量減少，則考慮增加鎂離子濃度（根據擴增片斷長度而定，片段長則相應鎂離子濃度應該高一些）；
若降低退火溫度，發現還是隻有引物二聚體，而且鎂離子的濃度在。
20-25mmol/l沒有區別，則考慮buffer等試劑沒有完全融解、混勻，導致吸取的試劑濃度不對；
以上次的pcr產物作模板二次pcr，可以伏昌提高引物與模板的特異性，減少引物二聚禪碧體，如果兩次時間間隔短的話，可以把原產物稀釋100－1000倍，如果間隔較長可以稀釋50－100倍。
2樓：僑枝糜寒梅
別的組的同學用的引物跟你的引物是一樣的嗎？如果一樣的話，那就要考慮您的模板質量碼拍的問題了。如果擴增不成功，電泳圖的底部都會有引物的遲脊羨條野旁帶。
3樓：網友
別的組的同學用的引物跟你的引物是一樣的嗎？如果一樣的話，那就要考慮您的模板質量的問題了。如果擴增不成功，電泳圖的底部都會有引物的條帶。
4樓：網友
那看你是做什麼實驗了，基本上出現引物二聚體沒什麼問題的，不影響實驗結果的。
普通pcr需要的引物對為（）
5樓：閒風自適
a.一對引物肢旅。
b.半對引物。
c.兩對引物。
d.多對引飢飢衫物。
正確答案：a
引物是如何影響pcr反應的
6樓：逢奕琛醜倩
引物是pcr反應中非常重要的一環，我認為引物對pcr的影響主要體現在2方面：
1，影響pcr的特異性。
也就是說，所擴增的片段能否是你想要的特異性目的片段，而不是非特異性雜帶，一般來說，引物與模板序列匹配的越多，其特異性越好，察運但引物並不是越長越好，其原因就是下乙個方面；
2，影響pcr的效率，在退火環節中，引物越長，退火的反應就越慢，過長時就會阻礙pcr反應的順利進行，而引物短，則能更廳沒盯快的使引物與模板結合，但其特異性就下降，有可能會出現「亂搭」的情況；
除此之外，引物的gc含量扮和以及引物二聚體。
的存在，也會影響pcr反應，但我認為主要的還是上述2方面（因為如果不考慮酶切位點的情況，往往目的片段已定時，引物序列能調整的主要就是其長度），所以需要根據模板的情況和目的片段特點，選擇合適長度和起始的引物，對pcr的順利進行是很有幫助的。
如有疑問，歡迎繼續討論，純屬手打，歡迎，祝愉快！
為什麼體外pcr用dna做引物，而體內的用rna
7樓：庹望亭郭胭
因為pcr是人工合成的引物，rna在體外不穩定，而且容易被rna酶汙染，容易降解。所以用dna做pcr的引物。
而在體內的話，是因為dna聚合酶只能從一段核苷酸序列後的3`端上加上dntp，使dna鏈不斷延伸，而不能從頭開始合成dna鏈；而rna聚合酶則可以從頭開始合成rna鏈，所以就出現了在體內用rna做引物，來合成dna鏈的情況。
8樓：太史付友尚媚
dna複製起始階段dna聚合酶需要藉助rna引物後的3『-oh來將。
dntp連線到先導鏈上，然後啟用複製。而pcr只是一種單純的擴增技術，dna和rna均滿足條件。
pcr當中兩個引物分別是怎麼樣的？具體詳細的說一下。是怎麼設計的？兩個引物的關係以及在pcr中起的作用。
9樓：馬佳利葉武乙
引物是一小段核苷酸。pcr中，兩個引物分別與目地dna的2條子鏈的兩端互補，也就是如果從圖的平面來看：乙個引物與上一條鏈的左端互補，另乙個引物與下一條子鏈的右端互補。
所以兩個引物的序列是不相同的，這樣才不會亂。
引物的作用：有了引物分別與子鏈互補，那些單個的脫氧核苷酸才能夠開始連線上去。
10樓：万俟蘭歸鶯
pcr擴增的引物分上下游引物（或senseprimer,anti-sense
primer),pcr
所擴增的片段就是上下游引物在dna鏈上所擷取的片段。上游引物與模板5『端序列相同，下游引物與模板3』端序列反向互補。一般引物序列長度為18~25鹼基。primer5
來設計。兩引物共同確定pcr擴增的產物的大小及位置。
請教減少pcr產物中引物二聚體的方法
11樓：網友
博凌科為-為你解答：pcr反應過程中產生引物二聚體是做pcr的各位戰友經常遇到的問題，下面介紹一些減少引物二聚體的方法： 1.
從引物自身著手，重新設計引物，這是最根本解決這一問題的辦法；2. 可能模板有問題；3. 模板濃度過小，適當加大模板量；4.
taq酶，引物，mg2+濃度可能過高，可降低它們的濃度；5. 取你所要加的上下游引物混合後，在100攝氏度下的沸水中煮5分鐘，然後迅速拿出至於冰塊之上瞬時冷卻，這時再加入反應體系當中，引物二聚體就會消失的；6. 所配mix中加5%的甘油或者5%的dmso，可以增強特異性； 7.
pcr反應體系的配製在冰上進行，最後加taq酶，pcr結束後，產物勿放置在室溫下過長時間，有人認為室溫下有些taq酶會將多餘的引物合成為二聚體； 8. 增加迴圈數；9. 降低退火溫度後有條帶，則應逐漸提高溫度，若提高溫度的同時產物量減少，則考慮增加鎂離子濃度（根據擴增片斷長度而定，片段長則相應鎂離子濃度應該高一 些）；10.
若降低退火溫度，發現還是隻有引物二聚體，而且鎂離子的濃度在 20-25mmol/l沒有區別，則考慮buffer等試劑沒有完全融解、混勻，導致吸取的試劑濃度不對；11. 以上次的pcr產物作模板二次pcr，可以提高引物與模板的特異性，減少引物二聚體，如果兩次時間間隔短的話，可以把原產物稀釋100－1000倍，如果 間隔較長可以稀釋50－100倍。
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