1樓：匿名使用者
因為actin含量比較高，所以相應的一抗和二抗的用量需要減少。整塊膜發亮，基本上就是抗體結合得太多了。先把二抗稀釋10-50倍再試試。
western內參兩個條帶是制膠的問題嗎
2樓：匿名使用者
有圖會好判斷一些。
如果是非常明確的兩個條帶應該不是制膠的問題。
膠只管分離，最後檢測到，只能說明兩個地方都有訊號。會不會是蛋白髮生了降解？
還得看你其他條帶的情況，另外實驗室其他人做這個內參有這個現象嗎？
做western blot時最後顯色用的是什麼試劑，原理是什麼
3樓：匿名使用者
dab顯色液。
dab被氧化-顯色-形成褐色顆粒，即是顯色。
western blot為什麼必須要用內參
western blot 內參 actin 是43還是45 kda
western blot 的內參不一致，急求助
在做western blot時，跑膠的電流為什麼越來越低
4樓：匿名使用者
所加緩衝液不夠新鮮，或者說是已經重複使用過很多次。內外槽緩衝液沒有一定的落差，緩衝液的ph不夠準確。如果是在恆壓的狀態下，因為凝膠裡的導電介質逐漸減少，電流逐漸減少也是比較正常的情況。
請教大俠，小弟做的western，內參很好，就是目的條帶出現了很多黑點，背景亮，是怎麼回事，謝謝
5樓：匿名使用者
沒看懂你的圖。。。中間那一條是你的條帶？
背景差可能是封閉的不好。。
另外，建議用x光片**的方式來收結果。
western blot 內參跑不齊怎麼調整
6樓：考研北工大
第一，應該。
來確認每個樣品表達gapdh的量自一樣，雖。
bai然是持家基因，本人du覺得不同細菌可能表達量不一樣zhi，造成訊號強弱dao不一樣。可以通過考馬斯亮藍染色來確定上樣量的差異，調整上樣量一樣再檢測gapdh。
第二，內參跑不齊。一般是跑膠時電流或電壓太大。還有可能是樣品中參雜著鹽離子等其他物質也會造成跑不齊。
第三，page膠的製備也很關鍵。看到條帶訊號連在一起，一方面因為膠不好，樣品擴散，另一方面蛋白表達量 高，**時間長。
第四，轉膜的效率會不會是不一致的，一抗、二抗的接合gapdh不好。都有可能。
第五，本人在發文章做wb的時候也是做過很多次，每次都是不一樣的結果。因為wb中間的步驟太多，影響因素很多，但是還是可以控制一下的。
第六，做過多次wb還是不行，建議新鮮製備蛋白樣品。
7樓：愛我家菜菜
內參，顧bai名思義就是內部參考du。廣義的內參可zhi指任何機構搜dao
集的供內部人員參考專的信屬息資料。在我國，新聞內參特指新聞**向各級黨政機關專門呈送的一種新聞報道，是新聞的一種特殊形式。與普通的新聞不同的是，新聞內參是一種不進行公開發布的報道。
目前，我們所說的「內參」通常即指新聞內參。
westernblot內參actin是43還是
在 western blot 中使用內參其實bai就是在 wb 過程中另du外用內參對應的抗zhi體檢測dao內參，這內樣在檢容測目的產物的同時可以檢測內參的表達，由於內參在各組織和細胞中的表達相對恆定，藉助檢測每個樣品內參的量就可以用於校正蛋白質定量 上樣過程中存在的實驗誤差，保證實驗結果的準確性...
westernblot為什麼出現兩條帶
western blot出現兩條帶是經常會copy發生的情況具體原因可能是該蛋白出現了同源二聚體，故都可以被抗體識別出來或者改蛋白有部分降解，但是未降解部分依然可以和抗體結合另外抗體特異性不高，也會出現非特異性的結合，造成出現兩條或者多條帶所以western blot會出現兩條帶 原因如下 1，可能...
關於小分子蛋白的western blot問題，實驗時的膠濃度
我最小bai也只做過十幾kd的。但是根據原 du理呢zhi主要有以下注dao意事項 1。回當然是膠的濃度。9kda的話要適 答當增大，15 20 應該差不多吧。如果實在不行還能考慮用gradient gel。2。二是轉膜緩衝液，內要含20 甲醇，新鮮配製，反覆使用的話注意甲醇會蒸發掉。如果連續使用的...