1樓:耽寂
引物本來就是單鏈的。書上畫成雙鏈才怪。
pcr所用的dna聚合酶只能順著已經存在的一小段dna的尾巴來接著合成,它不會自己起頭。引物就是這麼一小段用來起頭的dna。
dna本身很長很長,我們擴增時,只能擴增其中一小段基因。如何確定擴增哪一小段呢?就需要引物來幫忙了。
引物具有特殊的核苷酸序列,使它正好能與dna中某個特定的部位結合起來。你想一想,從直線上擷取線段時是不是需要一左一右兩個點呢?引物就相當與這兩個點,所以pcr需要兩個引物。
這兩個引物,我們通常稱之為一對引物,一個叫上游引物,一個叫下游引物。
2樓:匿名使用者
一小段寡聚的dna,一般有兩個(一對),分為上游引物和下游引物,分別指導dna兩條鏈的聚合。它們主要作用有兩個,一個是和模板特異性結合來指導taq聚合酶合成所要的片段。一個是提供一個3『端的-oh末端,只有擁有一個-oh末端,dna聚合酶才能合成dna。
在體內是由小段的rna來提供的,在體外pcr試驗中則用dna,因為dna比rna穩定易於儲存。
利用pcr技術擴增目的基因,引物是什麼?引物是什麼
3樓:匿名使用者
引物是人工設計合成的一對(兩個)小片段dna,具有和目的基因兩端互補的序列和人工設計的酶切位點,用於定位複製的起始位置和後續連線操作。
4樓:匿名使用者
引領dna單鏈結合互補
為什麼用pcr技術擴增目的基因不是用含鹼基的核苷酸而是用引物,引物是什麼東東,我高中的不要說的太複雜
5樓:孤獨的雪人
首先,我們來說一下pcr技術所用的酶。所用的酶是taq dna聚合酶,現在已知的所有的dna聚合酶在使單個的脫氧核苷酸聚合的時候都有一個共性,它無法從頭開始,只能在一段序列的末尾續接。在生物體內dna自行復制的時候也是如此,只不過那個引物是生物體內rna聚合酶合成的一段rna,在pcr的時候引物是人們合成的一段dna。
pcr技術大致有三步:第一步94°c使dna變性,雙鏈變單鏈;第二步65°c退火;第三步72°c延伸 依次迴圈。taq dna聚合酶是從極端微生物體內提取的,可以耐受高溫,所以用它。
說到引物,就可以說說一些在引物上做文章的技術。定點突變技術,在pcr的時候把引物的某一個核苷酸換成需要的突變核苷酸,pcr之後的產物就是在人為突變引物的後面續接而成的,就可以得到突變的目的dna。這裡只是舉一個典型例子,具體的在你今後學《分子生物學》和《生物化學》會逐步學到。
6樓:i就是愛問
引物是一小段單鏈dna或rna(一般用單鏈dna),作為pcr擴增的起始點,作為每個多核苷酸鏈進行延伸的出發點而起作用的多核苷酸鏈,在引物的3′-oh上,核苷酸以二酯鍊形式進行合成,簡單地說,引物就像是一個「嚮導」,引導4類脫氧核苷酸。模板dna、引物和4種脫氧核苷酸是必要條件。
pcr技術擴增目的基因,所用引物個數與擴增次數的關係
7樓:箕康勝璩苒
引物本來就是單鏈的。書上畫成雙鏈才怪。
pcr所用的dna聚合酶只能順著已經存在的一小段dna的尾巴來接著合成,它不會自己起頭。引物就是這麼一小段用來起頭的dna。
dna本身很長很長,我們擴增時,只能擴增其中一小段基因。如何確定擴增哪一小段呢?就需要引物來幫忙了。
引物具有特殊的核苷酸序列,使它正好能與dna中某個特定的部位結合起來。你想一想,從直線上擷取線段時是不是需要一左一右兩個點呢?引物就相當與這兩個點,所以pcr需要兩個引物。
這兩個引物,我們通常稱之為一對引物,一個叫上游引物,一個叫下游引物。
8樓:汲嘉言樓雯
引物是人工設計合成的一對(兩個)小片段dna,具有和目的基因兩端互補的序列和人工設計的酶切位點,用於定位複製的起始位置和後續連線操作。
pcr技術中「引物」是什麼?有什麼作用?引物需要複製嗎?
9樓:90阿
引物是一段短的單鏈rna或dn**段,可結合在核酸鏈上與之互補的區域,其功能是作為核苷酸聚合內作用容的起始點,核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。體外人工設計的引物被廣泛用於聚合酶鏈反應、測序和探針合成等。
引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補,另一個引物與感興趣區域另一端的另一條dna模板鏈互補。
在pcr(聚合酶鏈式反應)技術中,已知一段目的基因的核苷酸序列,根據這一序列合成引物,利用pcr擴增技術,目的基因dna受熱變性後解鏈為單鏈,引物與單鏈相應互補序列結合,然後在dna聚合酶作用下進行延伸,如此重複迴圈,延伸後得到的產物同樣可以和引物結合。 pcr引物設計的目的是找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板dna序列。如前述,引物的優劣直接關係到pcr的特異性與成功與否。
對引物的設計不可能有一種包羅永珍的規則確保pcr的成功,但遵循某些原則,則有助於引物的設計。
10樓:匿名使用者
pcr技術中「引物」是一小段dna,其作用是:作為dna複製的起點,當一次複製完成後,引物也不到了一條鏈上,下次複製時,引物也需複製。
11樓:大地君
引物就是一段dna啊,能讓dna聚合酶識別並在引物後進行鹼基互補配對。需要的
生物疑問 利用pcr技術擴增含目的基因的dna分子來形成目的基因,需要3步.為什麼?過程是什麼?
12樓:德基廣場
pcr技術copy過程簡介
1.將目的基因與引物,以及耐高溫的dna聚合酶加入pcr擴增儀中。加熱到90~95℃。讓目的基因解旋。
2.降溫至55~60℃,讓引物與①中的dna單鏈結合。
3.加熱至70~75℃,讓耐高溫的dna聚合酶工作,大量擴增目的基因。
什麼是pcr擴增目的基因?
13樓:中國農業出版社
pcr擴增技術已廣泛地用於分離目的基因。如果知道目的基因的全序列或其兩側的序列,可以通過合成一對與模板dna互補的引物,十分有效地擴增出含目的基因的dn**段,採用常規pcr技術擴增分離目的基因比較方便,但必須知道待擴增目的基因dn**段的核苷酸序列,或者至少要求dn**段兩端長約20bp的序列是已知的,這樣才能設計pcr引物進行有效做pcr擴增反應。
此外,利用常規pcr反應,允許擴增的dn**段長度一般在1kb以內,超過1kb時擴增效果顯著下降。對於擴增未知核苷酸序列的目的基因,或是那些長達幾千鹼基對的大基因,則需要選擇特殊型別的pcr策略,目前已採用的有套式pcr、反向pcr、不對稱pcr、錨定pcr、長程pcr、反轉錄pcr、鍋柄pcr和alupcr等。
求助,熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線
實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg 上下,所以溶解曲線不必從40deg 開始,可以從65deg 開始進行溶解曲線繪製,另外在產物之前出現的小峰,同時也在陰性對照中出現了,應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。通過你的描述目前還有很多資訊不實很瞭解 目的片段長度?pcr反應條件?管家基因的溶解...
熒光定量pcr擴增曲線開始有個下降的曲線
從你這個圖上看,這是非特異性的擴增。訊號非常弱,而且都超過40個迴圈還沒有訊號。之所以前面有下降,其實都是背景噪音訊號。你看縱座標的數值都非常的小。所以不是真正的擴增訊號,都是背景噪音干擾而已。沒有任何擴增產物。求助,熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線 實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg 上...
為什麼要進行目的基因的擴增
基因擴增的目的有很多。較常見的有做基因測序,轉化,構建重組質粒等基因水平的操作 為了增加目的基因整合進目標染色體的概率 利用pcr技術擴增目的基因,為什麼是三次 pcr擴增就是迴圈步驟,一般進行20 40個迴圈。每次迴圈 2 不考慮擴增效率 你說的三次是什麼意思?最多這樣 自己看圖理解 至此,就是三...