1樓：抹不掉呀
實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg;上下，所以溶解曲線不必從40deg;開始，可以從65deg;開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。
2樓：真莉莉畢田
通過你的描述目前還有很多資訊不實很瞭解：目的片段長度？pcr反應條件？
管家基因的溶解曲線怎麼樣？做的什麼實驗？是否將產物跑了電泳，條帶怎麼樣？
你可以將上述問題整理一下在一些專業性較強的生物論壇發帖子讓其他大神幫你分析一下。比如丁香園、生物秀等等。
出現怪異的溶解曲線大部分都是機器設定或者反應體系的問題，建議：
1、將擴增產物跑一下電泳，看一下目的條帶亮不亮2、一般定量pcr擴增後目的片段的峰在80~90℃之間，反應條件確認一下設定是否有問題
3、適當增加模板量或者減少引物濃度。
4、用的是哪個公司的酶？問一下這個公司的技術支援
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
3樓：匿名使用者
熒光定量pcr的溶解曲線理解：用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。
一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化，開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的。
接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
4樓：匿名使用者
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
5樓：奔馬的香香豬
溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。溶解曲線分析可以用來確定不同的反應產物，包括非特異性產物。擴增反應完成後，通過逐漸增加溫度同時監測每一步的熒光訊號來產生溶解曲線，隨著反應中雙鏈dna變性，熒光染料又回覆到遊離狀態導致熒光訊號降低，用熒光訊號改變的負的一次導數與溫度作圖，在擴增產物的溶解溫度上有一特徵峰（tm，dna雙鏈解鏈50%的溫度），用這個特徵峰就可以將特異產物與其它產物如引物二聚體區分開，因為它們在不同的溫度溶解.
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！我們實驗室用bioghc elitefast sybr kit檢測dna,熔解曲線是為了驗證擴增產物特異性的，要是熔解曲線是單峰說明產物只有一條，結果較好；要是雙峰說明產物不特異，可能存在引物二聚體或非特異性擴增，有可能你的引物設計有問題。
6樓：匿名使用者
溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似於電泳。那麼你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關係。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。
出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始pcr這之間的時間過長）所致；基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
詳細請見我的回答
7樓：表詠蒿樂蓉
用syber
green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。
曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
熒光定量pcr熔解曲線
8樓：匿名使用者
溶解曲線是在正常的pcr反應基礎上加一個溶解曲線的反應條件，其中當溫度由60℃升至95℃時，pcr儀每隔一定的溫度檢測一次訊號。最後將收集的訊號繪製出溶解曲線，然後將溶解曲線一次微分就會得到我們平時看到的峰性圖。每一條線代表著某個孔裡的反應體系裡產物的單一情況，某一條線如果為單峰且在一定合理的溫度範圍內（一般為80~90℃）則認為正常，如果為雙峰則可能有非特異性擴增。
由此可以判斷產物是否為目的基因且是否單一。內參有內參的線，目的基因有目的基因的線，同一條線不會出現兩個基因的峰。你可以看一下溶解曲線的橫、縱座標。
9樓：烏冬蛋白
內參量多，迴圈數少吧，我也不熟
熒光定量pcr中擴增曲線能說明什麼問題
10樓：南京金益柏生物科技****
在熒光法定量pcr中溶解曲線直接表示了引物的特異性,如果是單一的峰,那麼我們要看的是tm值在**,通常情況下都是80---90之間,如果太小那可能擴增出來的不是你想要的片段就是引物二聚體,如果兩個峰那就說明出現了非特異性擴增
熒光定量pcr擴增曲線開始有個下降的曲線
從你這個圖上看，這是非特異性的擴增。訊號非常弱，而且都超過40個迴圈還沒有訊號。之所以前面有下降，其實都是背景噪音訊號。你看縱座標的數值都非常的小。所以不是真正的擴增訊號，都是背景噪音干擾而已。沒有任何擴增產物。求助，熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線 實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg 上...
多重pcr和多重熒光定量pcr的區別
正常啊，定量pcr很靈敏的，體系稍微變化就會誤差很大，更何況你這樣反應體系都不一樣。所以一般定量結果只是作為佐證，最好別太相信。你想做好，就儘量保證每個體系是一致的，最後結果趨勢是一致的就行了。多重pcr可以同時檢測多個基因，聽我師兄說前段時間他們實驗室用bioghsc kit同時設計了5條引物，逆...
熒光定量PCR的熒光訊號強度和什麼有關係
常規pcr中，在擴增反應結束之後，我們一般通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，無法對pcr擴增反應進行實時檢測，也無法對起始模板準確定量，而很多情況下，我們所感興趣的是起始模板量，如轉基因動植物中插入某種外源基因的拷貝數或者病人中某種病毒dna rna的精確copy數等，如此，熒光定量pcr...