1樓：匿名使用者
如果pcr系統沒有問題，很可能是質粒和染色體發生了重組。建議提細菌的genome dna 做一次pcr。如果是陽性，就說明是這樣。
另外，還可以另挑幾個菌落，重新提質粒擴增。
2樓：羽動一生
每次都這樣嗎？是不是質粒pcr體系有問題呀？
3樓：匿名使用者
挑斑的時候汙染到其他菌落了，重新挑斑，再驗證。
質粒連線目的片段，菌液pcr後電泳有目的條帶，為什麼送菌液測序結果是空載體呢 ？
4樓：exo不偷井蓋
1、你bai
的實驗目的是什麼？ 2、如果du是克zhi隆，連線t載體後不用酶dao
切，直接轉化菌專落pcr檢測有目屬
的條帶的話送樣測序即可。 3、如果是做表達載體構建，pcr產物和質粒dna酶切後與沒有酶切的在同一塊膠上電泳，如果兩個酶切位點很近，幾乎看不到被切下來的小片段條帶（太小，早就跑出去了）。你要是怕酶切不完全就多稍微加點酶，切的時間長一點。
4、關於酶切產物有幾條帶視酶切效果而定，酶切完全則兩條，一大一小（小的可能看不到，原因見3、）酶切不完全則三條帶，一大一小及未切開的pcr產物；質粒的話可能還多一條環狀分子和線狀分子的區別。
5樓：落葉來也
確定有目的條帶麼?
如果確定連上了，可能就是挑菌的時候不是單菌落，重新挑，或者原點再取點，塗布或者劃線。
我的目的片段**體後，挑單克隆搖菌，用菌液pcr，沒有條帶。為什麼啊？
6樓：阿魯巴星人
假陽性1.平板是否加抗性？
2.引物設計是否有問題？
3.載體自連現象是不是很嚴重？建議做個對照4.菌落pcr條件是否合適？
在做載體構建的時候，pcr時有目的條帶，但是搖菌酶切沒有東西，請問是怎麼回事啊？急求！！！！！！！！！
7樓：冬子燕
應該是目的片段和載體沒連線上，挑取菌落時用陽性克隆的。
8樓：匿名使用者
目的基因有沒有連線到載體上？有沒有經過測序驗證？
菌液pcr有條帶，但提不出質粒，為什麼？
9樓：百里屠蘇
同樣的問題來
，我也正經歷著自，彆著急慢慢分析原因。
如果你bai做得是du質粒的構建，
zhi我想根本的原因是沒有連線上，那dao得重新做，考慮連線的問題。
對於你的那個5天得菌液，原則上說菌液放久了，質粒可能會丟失，你可以重新再在抗性培養基裡（如果有抗性的話）搖一下。如果沒連線好的話估計也提不出質粒。
慢慢來，共勉！
為什麼我的目的基因連線克隆載體轉化、提質粒後，酶切鑑定正確，而質粒pcr和菌液pcr鑑定都不正確呢？著急
10樓：匿名使用者
不管酶切還是pcr，都是間接的結果。要確定克隆的正確，一定要測序的啊。
你測個序，問題就迎刃而解了。到底是什麼問題也就清楚了。
11樓：匿名使用者
因為 轉化過程你沒出來好 加點 kml 再轉化 提質後 分別切2 這樣就正確了
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