1樓:我愛學習
pcr技術的基本原理:
該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依靠於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板,藉助一小段雙鏈dna來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環境下,dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3´-oh末端,並以此為起始點,沿模板5´→3´方向延伸,合成一條新的dna互補鏈。
pcr技術的應用:
pcr技術首次臨床應用就是從檢測鐮狀細胞和β-地中海貧血的基因突變開始的。
pcr在醫學檢驗學中最有價值的應用領域就是對感染性疾病的診斷。理論上,只要樣本有一個病原體存在,pcr就可以檢測到。
pcr技術不但能有效的檢測基因的突變,而且能準確檢測癌基因的表達量,可據此進行腫瘤早期診斷、分型、分期和預後判斷。
pcr原理是什麼?
2樓:胡鬧鬧旅遊
pcr原理是生物學的聚合酶鏈反應。pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°c左右)時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合,再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度(72°c左右),dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
pcr反應特點:
1.特異性強。
引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循鹼基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及taqdna聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
2.靈敏度高。
pcr產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12)量級的起始待測模板擴增到微克(μg=-6)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,pcr的靈敏度可達3個rfu(空斑形成單位);在細菌學中最小檢出率為3個細菌。
3.簡便快速。
pcr反應用耐高溫的taq dna聚合酶,一次性地將反應液加好後,即在dna擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性汙染、易推廣。
4.純度要求低。
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,dna粗製品及rna均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛髮、細胞、活組織等dna擴增檢測。
以上內容參考:百科-聚合酶鏈式反應。
pcr技術的原理?
3樓:匿名使用者
教材中有一句話:pcr利用了「dna的熱變性原理」,通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結合。
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