RFLP PCR的定義是什麼，PCR的原理是什麼

1樓：

pcr後再做rflp，以前做過乳酸菌的，用來比較種間差異性

有興趣可以聊聊

pcr的原理是什麼

2樓：凱是凱喵的凱

pcr（聚合酶鏈式反應）技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性→退火→延伸三個基本反應步驟構成：

①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。

②模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合。

③引物的延伸：dna模板--引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。

重複迴圈變性→退火→延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

3樓：demon陌

pcr原理：

dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在dna聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。

pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。

pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：

①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；

②模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；

重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

4樓：次次次蛋黃米亞

pcr技術的基本原理：

該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依靠於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板，藉助一小段雙鏈dna來啟動合成，通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合，形成部分雙鏈。

在適宜的溫度和環境下，dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3´-oh末端，並以此為起始點，沿模板5´→3´方向延伸，合成一條新的dna互補鏈。

最近在做pcr-rflp，本來是兩個條帶的，卻切成了三個條帶，是不是酶切不完全造成的啊？怎麼解決啊？

5樓：匿名使用者

你好，首先你要確認這個裡面確實沒有發生酶切位點的變化（同你的與其相比）。另外，最下面往往有一條雜帶，那個是干擾的，可以不用看。如果這些問題都不是，那基本上酶切不完全造成的，可以延長酶切時間或者摸索更好的酶切條件。

請教pcr內標對照

6樓：初夏之橙

內參就是模板中除了你的目的基因，還要有一個這個模板中肯定存在的基因，用來檢測你模板的質量。也就是說，如果在同一模板中，如果你沒擴出目的基因，但擴出了內參，就說明不是模板的問題。

陽性對照就是你的實驗應該出現的結果，就是用你的結果和陽性對照對比用。

陰性對照就是本底，起排除干擾的作用。

關於實驗原理的問題，建議看《分子生物學實驗指南》。