1樓：
冰浴過程中，原來加在溶液中的鈣離子和細菌細胞膜結合，在低溫下形成液晶結構，這樣，在42度熱激下，這種液晶結構收縮，將細胞膜扯開孔道，使dna進入細菌細胞中。這就是原理。
2樓：匿名使用者
在0～4℃，cacl2低滲溶液中，細胞膨脹成球狀，轉化混合物中的dna形成抗dna酶的羥基－鈣磷酸複合物黏附於細胞表面，較低的溫度也降低了相關酶的活性較好的儲存了dna的，
這裡的冷處理和熱激使細胞變成可接受dna狀態的作用機理目前是還不為人所知的，自從mendel和higa在2023年發現這一處理效果以來，所有的轉化都在這麼做，效果還是值得肯定的。
轉化感受態細胞的目的是什麼轉化感受態細胞的前因後果
3樓：匿名使用者
感受態細胞指的是經處理後，處於能吸收周圍環境中dna分子生理狀態的微生物細胞，在轉基因技術操作過程中要將重組dna分子匯入微生物受體細胞時就需要用感受態細胞。所謂轉化是目的基因進入受體細胞並在受體細胞中維持穩定和表達的過程。（1）質粒dna的質量和濃度，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，則會使轉化率下降;ml左右，且注意防止被其它試劑。
（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同），大於30kb的重組質粒將很難進行轉化：所用的cacl2等試劑均需是最高純度的。對tg1菌株。
所有的試劑都要滅菌。對於以質粒為載體的重組分子而言： 用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，並經高壓滅菌處理，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。
一般地。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳，所用器皿，並用最純淨的水配製，細胞密度在5×107個/：整個操作過程均應在無菌條件下進行，分子量大的轉化效率低，移液槍頭等最好是新的，不能離開冰浴，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，否則細胞轉化率將會降低，可通過測定培養液的od600控制、dna酶或雜dna所汙染，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比。
密度過高或不足均會使轉化率下降。不要用已經過多次轉接。（二）感受態細胞轉化中的影響。
（2）感受態細胞的質量。整個操作均需在冰上進行，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，實驗證明，及貯存在4℃的培養菌液，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子，最好分裝儲存於4℃ （3）細胞的生長狀態和密度 最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。即應用對數期或對數生長前期的細菌，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入，od600為0．5時，如離心管
製備感受態細胞的關鍵是什麼
4樓：anyway丶
製備感受態細胞的關鍵是將外源dna分子引入受體細菌，使之獲得新的遺傳性狀。
主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。將構建好的載體轉入感受態細胞進行表達，不僅可以檢驗重組載體是否構建成功，最主要的是感受態細胞作為重組載體的宿主可以進行後續實驗，如蛋白質表達純化等工作。
擴充套件資料
製作方法
cacl2法
1.將快速生長的大腸桿菌置於經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞
細胞膜通透性發生變化，極易與外源dna相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣複合物。
聯合其它的二價金屬離子（如mn、co）、dmso或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100～1000倍。
2.此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，並隨機出現許多間隙，外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達，實現遺傳資訊的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。
電轉法電擊法不需要預先誘導細菌的感受態，依靠短暫的電擊，促使dna進入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環dna。
5樓：匿名使用者
儘量使細胞保持在低溫下，可冰浴，這樣可降低細胞代謝率，防治細胞的大量死亡。因為無培養基，代謝強，則會引起大量細胞死亡。
6樓：浙大阿米巴
熱激的時間和操作速度掌握好
當質粒轉化進大腸桿菌時，通過什麼原理表達目的基因
7樓：聽風
當質粒來轉化進大腸桿菌時，通過源dna複製原理表達目的基因。
baicacl2對特定du的大腸桿菌處理，製備感受zhi態的細菌。dao這些細菌可使每微克超螺旋質粒dna，如一些插入目的dn**段的重組質粒，產生5×106~2×107 個轉化的菌落。當質粒與這些大腸桿菌混合後，質粒粘附在大腸桿菌的表面，在42℃的溫度時，大腸桿菌出現熱休克，質粒可通過大腸桿菌細胞膜上形成的空隙進入菌體內。
隨後，加入lb培養液，於37℃振動培養可使細菌復甦，並且表達質粒編碼的抗生素抗性基因，提高轉化效率。轉化成功的大腸桿菌可以在相應抗生素培養皿中傳代，形成菌落。
由於大腸桿菌繁殖快，在適宜的條件下繁殖一代僅需要20~30分鐘，而且常用質粒可以在大腸桿菌中達到幾百個拷貝，因此，通過對轉化成功的大腸桿菌培養，可以在短時內極大地擴增目的質粒。（作為分子生物學用大腸桿菌，是經過實驗室改造過的工程菌。）
大腸桿菌感受態細胞製備時的cacl2濃度到底是多少
8樓：匿名使用者
（1）質粒dna的質量和濃度： 用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。
對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。 （2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃ （3）細胞的生長狀態和密度 最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。 （二）感受態細胞轉化中的影響： 整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。
所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
感受態細胞的製備時有什麼注意事項
9樓：天寂無痕
1、培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法，它實際是利用了所有有利於感受態的文獻而得出的一
個非常理想方法。
2、在儲存感受態時，dmso 要比甘油的效果要好，它會使感受態的效率增加。
3、液氮速凍也會使感受態的效率提高，因此推薦用液氮速凍感受態，然後儲存於超低溫冰箱內。
4、凍存的感受態用一次拿一管，不要反覆凍融。化凍之後立即使用，不要冰上放太久。
5、操作時可以輕彈輕甩，儘量避免用移液器吹吸。
10樓：y神級第六人
（1）質粒dna的質量和濃度：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
（2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃
（3）細胞的生長狀態和密度
最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
（二）感受態細胞轉化中的影響：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
農桿菌的感受態細胞裡帶有ti質粒嗎
11樓：匿名使用者
農桿菌之所以被用於轉基因工程，就是其含有ti質粒，ti質粒上的t-dna上有8個左右的回
基因在植物細答胞內表達，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞後，可將t-dna插入到植物基因組中。因此，可以通過將目的基因插入到經過改造的t-dna區，藉助農桿菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移和整合，然後通過細胞和組織培養技術，得到轉基因植物。
感受態可以再擴增用來製備感受態嗎
方法一 細菌轉化的方法多以mendel和higa 1970 的發現為基礎，其基本方法是用冰預冷的cacl2或多種2價陽離子等處理細菌，使之進入感受態得以轉化。用cacl2製備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞，常用於成批製備感受態細菌。感受態細胞的製備和轉化中 為什麼要加兩次cacl2？cacl2為什麼...
感受態細胞的製備為什麼要在冰上操作
停止細菌增殖 加入金屬離子後，細胞膜低溫容易形成液晶態，轉化效率高。感受態細胞的製備時有什麼注意事項 1 培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法，它實際是利用了所有有利於感受態的文獻而得出的一 個非常理想方法...
感受態細胞的製備和轉化中為什麼要加兩次Cacl2？Cacl
方法一 細菌轉化的方法多以mendel和higa 1970 的發現為基礎，其基本方法是用冰預冷的cacl2或多種2價陽離子等處理細菌，使之進入感受態得以轉化。用cacl2製備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞，常用於成批製備感受態細菌。感受態細胞的製備和轉化中 為什麼要加兩次cacl2?cacl2為什麼...