用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化方法

1樓：匿名使用者

原因：目的基因匯入植物細胞時，由於沒有經過鈣離子處理沒有變成感受態細胞，細胞的通透性小，目的基因難以進入細胞。

感受態細胞主要原理：

1、通過處理使細胞的通透性變大。

2、使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。

3、由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。

擴充套件資料：

氯化鈣法：

1、將快速生長的大腸桿菌置於經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞。

2、此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，並隨機出現許多間隙，外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達，實現遺傳資訊的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。

3、將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。

2樓：無語翹楚

感受態細胞（***petent cell）：理化方法誘導細胞，使其處於最適攝取和容納外來dna的生理狀態。

主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。

1. 將快速生長的大腸桿菌置於經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹；

ca離子會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞細胞膜通透性發生變化，極易與外源dna相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣複合物。

聯合其它的二價金屬離子（如mn、co）、dmso或還原劑等物質處理，可使轉化率提高100～1000倍。

2. 將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，並隨機出現許多間隙，外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達，實現遺傳資訊的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。

3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。

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總之ca離子使dna沉澱於細胞表面（類似真核轉染的磷酸鈣共沉澱），0-42℃的熱衝擊使得膜表面出現裂痕（很快會被自動修復-疏水作用）使得膜表面dna被攝入。

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大腸桿菌是格蘭陰性，細胞壁就是肽聚糖+外膜（脂蛋白、脂質雙層、脂多糖）

這種細胞壁結構除了作為內毒素使機體發熱、白細胞增加之外（當然還可以為此細菌形態、耐藥性、結合mg2+維持離子平衡），與細胞膜出現裂痕吸收dna並沒有什麼關係。

3樓：匿名使用者

用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化只是使得細菌處於敏感狀態，並沒有涉及到基因的轉移。

4樓：為水情狂

先要改變細胞膜的通透性才能使物質進入

為什麼用鈣離子處理原核細胞獲感受態細胞

5樓：北京索萊寶科技****

感受態細胞（***petent cell）：理化方法誘導細胞，使其處於最適攝取和容納外來dna的生理專狀態。

主要原理屬就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。

6樓：匿名使用者

用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化

只是使得細菌處於敏感狀態,並沒有涉及到基因的轉移。

用鈣離子處理大腸桿菌，為什麼是改變細

7樓：

用鈣離子處理大腸桿菌，使細胞處於一種容易吸收周圍環境中dna的生理狀態（使細胞膜的通透性增加），這種大腸桿菌成為感受態細胞。

8樓：司寇俊豪呂玄

用鈣離子處理大腸桿菌,會使細胞膜通透性發生變化,原因是ga離子會使磷脂雙分子層形成液晶結構,且在一定溫度下（約42℃）晶體結構發生抖動形成孔隙.