1樓:北京索萊寶科技****
感受態細胞(***petent cell):理化方法誘導細胞,使其處於最適攝取和容納外來dna的生理專狀態。
主要原理屬就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的說,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。
2樓:匿名使用者
用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化
只是使得細菌處於敏感狀態,並沒有涉及到基因的轉移。
用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化方法
3樓:匿名使用者
原因:目的基因匯入植物細胞時,由於沒有經過鈣離子處理沒有變成感受態細胞,細胞的通透性小,目的基因難以進入細胞。
感受態細胞主要原理:
1、通過處理使細胞的通透性變大。
2、使得細胞膜表面出現一些孔洞,便於外源基因或載體進入感受態細胞。
3、由於細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。
擴充套件資料:
氯化鈣法:
1、將快速生長的大腸桿菌置於經低溫(0°C)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹,同時ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來,離開所在區域,誘導細胞成為感受態細胞。
2、此時,將該體系轉移到42°C下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,並隨機出現許多間隙,外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達,實現遺傳資訊的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3、將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養,篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。
4樓:無語翹楚
感受態細胞(***petent cell):理化方法誘導細胞,使其處於最適攝取和容納外來dna的生理狀態。
主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的說,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。
1. 將快速生長的大腸桿菌置於經低溫(0°C)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹;
ca離子會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來,離開所在區域,誘導細胞成為感受態細胞細胞膜通透性發生變化,極易與外源dna相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基-磷酸鈣複合物。
聯合其它的二價金屬離子(如mn、co)、dmso或還原劑等物質處理,可使轉化率提高100~1000倍。
2. 將該體系轉移到42°C下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,並隨機出現許多間隙,外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達,實現遺傳資訊的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養,篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。
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總之ca離子使dna沉澱於細胞表面(類似真核轉染的磷酸鈣共沉澱),0-42°C的熱衝擊使得膜表面出現裂痕(很快會被自動修復-疏水作用)使得膜表面dna被攝入。
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大腸桿菌是格蘭陰性,細胞壁就是肽聚糖+外膜(脂蛋白、脂質雙層、脂多糖)
這種細胞壁結構除了作為內毒素使機體發熱、白細胞增加之外(當然還可以為此細菌形態、耐藥性、結合mg2+維持離子平衡),與細胞膜出現裂痕吸收dna並沒有什麼關係。
5樓:匿名使用者
用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化只是使得細菌處於敏感狀態,並沒有涉及到基因的轉移。
6樓:為水情狂
先要改變細胞膜的通透性 才能使物質進入
用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化方法
原因 目的基因匯入植物細胞時，由於沒有經過鈣離子處理沒有變成感受態細胞，細胞的通透性小，目的基因難以進入細胞。感受態細胞主要原理 1 通過處理使細胞的通透性變大。2 使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。3 由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。擴充套件資料 氯化鈣...
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