1樓：匿名使用者
dna工程，還是高中的知識，所以可能不正確
先用dna剪下酶剪短質粒dna，然後把待轉dna用dna連線酶連線到斷裂處
鑑別則用培養基，看是否有轉入dna所期望達到的功能
如何將一個質粒dna轉入到大腸桿菌感受態細胞中
2樓：萘兒帕爾特管一
不對,通過轉化到感受態
細菌中,不是細胞.感受態的大腸桿菌,可以自己製作也可以通過購買回.之後答將細菌凃到含有抗生素的板子上,長出克隆後挑取單克隆,將單克隆加入含有抗生素的細菌培養基中培養,之後提取質粒,提取質粒可以購買相應的試劑盒,按照試劑盒的說明書操作即可.
質粒是帶有抗性基因的,只有含有該質粒的細菌才能在含有對應抗生素的培養基中存活並增殖,這樣就能確保是你的表達載體質粒.當然為了防止雜菌的汙染,整個過程中最好是無菌操作.而表達載體質粒有可能出現突變等情況,所以可以在提出質粒之後,取少量質粒送測序,來確保序列的無誤.
怎樣檢驗感受態細胞轉化是否成功
3樓：匿名使用者
當然是利用篩選平板了。
經典的就是藍白斑實驗。不過我們上學期做的紅綠熒光蛋白的，直接用普通平板，到時觀察有無熒光就行了。
4樓：匿名使用者
將空載體轉化上去，平板篩選，看生長的克隆數
為什麼不是所有的大腸桿菌都成功轉入了質粒
5樓：華達呢密麻麻
影響轉化效率的因素很多，主要有：感受態細胞製備的質量、受體菌生長期（大腸桿菌在對數生長期易產生感受態）、質粒的大小和構型、所用試劑的純度、接種前菌種的保藏方式、冰浴時間（延長冰浴時間可略微提高轉化率）、器皿的清潔度、化合物及無機離子（rb+、mn+、二甲基亞碸能適當提高轉化率）、質粒與細胞個數的比例（質粒與細胞個數比例在1:1以下時，轉化率隨著加入dna的量增加而呈線性增加）。
（1）細胞生長狀態和密度。密度不足或過高會使轉化率下降。
（2）質粒dna的質量和濃度。用於轉化的質粒dna應主要是共價閉環dna。轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，量過多貨體積過大時，轉化率下降。
（3）試劑的質量。
（4）防止雜菌和其他外源dna的汙染。
（5）根據所需質粒dna的特性，設定相應的選擇性培養基進行篩選，有的可能還需進行多補篩選。
6樓：bie___汀
不一定所以需要通過質粒上的標記基因檢測
7樓：貓太郎
很多野生型大腸桿菌非重組酶缺陷 非內切酶缺陷 等
所以不是轉不進去 是質粒在這些宿主中很不穩定
大腸桿菌細胞中都有質粒dna對嗎
8樓：太歲
正常的應該都有。
但如果像是被噬菌體入侵、x射線照**就得另當別論了。
質粒轉染的大腸桿菌為什麼要挑選單克隆?
9樓：
因為我們挑的是菌落，而一般我們認為一個菌落就是又一個細菌繁殖產生的。所以菌落內的細菌都是同一基因型（也就是說要不然都帶有質粒，要不然都沒有或者是其他質粒），也就是說要挑單克隆。
如果挑的不是單克隆，那麼菌落內的細菌的種類就會不同，有的有質粒，有的沒有，有的帶其他質粒。這樣的話，我們做後續的實驗就不好做了。
轉化實驗中除了用大腸桿菌的感受態細胞還可以用哪種菌的感受態細胞?
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