1樓：伊良部一郎
是融合表達 還是bai
非融合？
du如果是非zhi融合 想在一個啟動子之下還dao是分別專各用一個啟動屬子？
這個要先想清楚了 才能設計方案 找載體 切點 設計引物等構建方法基本如ls說的 基本上就是的就是一個一個的往載體中連
2樓：匿名使用者
選擇合適的限制性內切酶同時酶切基因和質粒 然後用連線酶進行酶連就行了
3樓：匿名使用者
設計各基因的酶切位點，此酶切位點必須在質粒上也存在，然後讓基因一個個地插入到質粒中，這個過程涉及基因工程的步驟
4樓：愛有靈犀藝點通
要用到限制性內切酶和dna連線酶 而且目的基因上的酶切點在質粒上必須有 才能有相同的粘性末端 才能連線
如何將兩個基因構建到同一個載體上
5樓：星星
利用同一限制性內切酶種切取同一種粘性末端然後再用同一種連線酶講他們聯絡起來，再用質粒將其匯入受體菌的染色體中，
6樓：007浮雲漫天
還可以用soe-pcr法將兩基因連到一起，但你要考慮載體啟動子的問題，可能由於融合基因構象或啟動子能力的問題無法正確表達。你可以設計雙啟動子。
7樓：匿名使用者
就是dna酶切和連線實驗，具體什麼基因什麼內切酶要根據你的目的基因選定，大膽做，沒問題的
求教：2個目的基因如何匯入一個載體
8樓：匿名使用者
2個目的bai基因如何匯入一個du載體.
基因操作過程中使用運載體zhi有兩個目的dao：一是用它回作為運載工具,將目的基因轉移答到宿主細胞中去；二是利用它在宿主細胞內對目的基因進行大量的複製（稱為克隆）.
攜帶外源dn**段的質粒進入受體細胞後,停留在細胞中進行（自我複製）或整合到細菌擬核dna中,隨著擬核dna的複製而複製.
載體除了質粒以外,還有噬菌體載體、病毒載體等.
如何將兩個外源基因匯入到一個質粒載體？
9樓：匿名使用者
我用過來
這個載體，這
源個載體上本身就有一個抗性基因，它是抗卡納的載體，我當時用的是bamhi和hindiii切的，你可以查一下這個載體的圖譜，ecori和bamhi應該沒有切開這個抗性基因。如果這個抗性基因真的被切開了，那就只能插入抗性基因了，不過做雙突變載體的構建成功率比較低，我建議你可以試試看一下有沒有其他的酶切位點可以把你的目的基因插入到這個載體中，如果一定要做雙突變就只能查該載體中的另外兩個酶切位點，而且這兩個酶切位點在目的基因中不存在，如果不能滿足這些條件，就不能完成雙基因插入的載體構建了。
一個目的基因在質粒上，如何將其擴增出來並做實時熒光定量pcr？
10樓：rain丶
是這樣的，pcr的原理就不闡述了，實時熒光定量pcr的基本原理是，在pcr體系中，加入引物的同時，加入能與目的基因結合的帶熒游標記的寡核苷酸，一條完整的寡核苷酸上有熒光淬滅基團，它能吸收熒光訊號。 dna聚合酶要選擇具有3'到5'外切酶活性的酶，這樣在pcr擴增過程中，從引物方向過來的dna聚合酶會把寡核苷酸一個個切掉，在切掉之後，淬滅基團被破壞，熒光訊號散發出來被儀器接收，每複製一條dna就產生一個熒光訊號，熒光訊號累積就能與pcr產物同步，這樣就是跟蹤pcr產物。
樓主提取質粒以後需要經過一次瓊脂糖凝膠電泳定量，然後對質粒進行稀釋，稀釋到適當濃度，不然無法確定需要加多少dna模版在才能滿足反應體系的要求，引物設計沒有別的要求，只要能完整擴出樓主想要的基因就行。定量的話，根據機器收到的熒光訊號就可以定量了。
以上僅個人愚見。
11樓：哼笨蛋蛋
引物當然要有酶切位點啦，這個是必要的，還需要有保護鹼基還有和目的基因對應的差不多有20個鹼基
質粒載體的四個基本特徵
12樓：匿名使用者
條件：①要具有限制酶的切割位點②要有標記基因（如抗性基因）以便於重組質粒的篩選③能夠在宿主細胞中穩定存在並複製④是安全的對細胞無害
13樓：匿名使用者
1,有多個限制酶切割位點;具有標記基因;能在宿主細胞中自主複製;不損害宿主細胞
2,不知道什麼是基因克隆..這個是基因工程的步驟....
獲取目的基因;把目的基因匯入載體;把載體匯入受體細胞;目的基因的檢測與表達
3,4 123來不及回答的很好`
我只是補充一下,1,2條是在生物書上的..自我感覺比他的稍準確點..嘿嘿``
14樓：123來不及
1 具有自我複製的能力；有1到多個限制酶切割位點；有標記基因（抗藥性基因）；對宿主細胞無害
2 獲取目的基因；構建表達載體；匯入受體細胞；對目的基因的檢測和鑑定
3 一個羊的體細胞的細胞核取出，放入另一隻羊去核的卵細胞中，將這個新組建的細胞放入第三隻羊的子宮內，生出的小羊就是「多莉」。這是利用核移植技術進行的克隆。
4 比如轉基因技術培育的抗蟲棉，可以提高棉花對害蟲的抵抗能力，這是對人類有利的；但如果將克隆技術濫用的話，可能產生很多社會法律方面的糾分。
學文的不需對這一部分做深入瞭解。必修二中對基因工程有一些初步介紹，只把那個搞清楚就行了。
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