1樓：魅力啄木鳥
免疫熒光染色快捷,靈敏.
標本冰凍切片,石蠟切片?切片厚薄?影響抗孵育間.
選用較佳抗工作濃度.
二抗需a液b液室溫混合15鍾再用.
標本需儲存-20度.
免疫熒光染色的一抗，二抗分別用什麼稀釋？ 5
2樓：之何勿思
pbs稀釋。當然最好用封閉液直接稀釋，再加一點tritonx100效果好。
培養液成分太多了。而且固定之後細胞都死了，用培養液沒什麼意義，只要保證其ph等條件適合就好了。
抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數。上網查一下，有很多protocol。一般一比幾百到一萬都有，依抗體而定。可以4度過夜，這樣染色效果好。
二抗一般較便宜，一般1：50到1：200多。
免疫熒游標記為什麼不直接標記一抗而標記二抗？
3樓：e拍
因為一種一抗只識別一種底物，如果每種一抗都需要熒游標記，那這樣成本很高。而二抗既可以和一抗結合，又帶有可以被檢測出的標記（如帶熒光、放射性、化學發光或顯色基團），作用是檢測一抗，提高了通用性。
一抗是針對抗原的抗體，二抗是針對一抗的抗體，即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。一抗二抗都是一種可以特異結合別的物質的基團，而且一抗可以至少結合兩種其他基團（底物和二抗）。
擴充套件資料
免疫熒光技術是標記免疫技術中發展最早的一種．它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。coons等於2023年首次採用熒光素進行標記抗體獲得成功。經過幾十年的發展，該技術已相當成熟。
主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程式也還比較複雜。
熒光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性汙染，並且大多操作簡便，便於推廣。國外生產的tdm用試劑盒，有相當一部分即屬於此類，並且還有專供tdm熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產。
由於一般熒光測定中的本底較高等問題，熒光免疫技術用於定量測定有一定困難。新發展了幾種特殊的熒光免疫測定，與酶免疫測定和放射免疫分析一樣，在臨床檢驗中應用。
4樓：匿名使用者
熒光基團可以直接標記一抗，許多抗體公司都有熒游標記的一抗**。但是這樣成本高，一抗有成千上萬種，如果每種一抗都需要熒游標記，那使用起來非常不方便。所以通行的做法是標記二抗，而二抗的抗原則是一抗的igg，比如二抗可以標記兔抗鼠igg，那麼所有**於鼠的一抗就都可以用這個二抗進行檢測，提高了通用性。
免疫熒游標記為什麼不直接標記一抗而標記二抗
5樓：義翹神州加油
二抗能起到訊號放大的作用，如果僅僅依賴一抗，可能抗體需要量以及光亮強度都會受侷限。
即，一抗負責準確識別靶標分子，二抗負責訊號放大。典型實驗結果如下圖：
6樓：旁可居興
熒光基團
直接標記抗許
抗體公司都
熒游標記抗售
本高抗千萬種
每種抗都需要熒游標記
使用起非便所
通行做標記二抗
二抗抗原則
抗igg比二抗
標記兔抗鼠igg
所源於鼠抗都
用二抗進行檢測
提高通用性
關於免疫染色的問題，為什麼要用一抗二抗？直接把熒光基團連到一抗上不就行了嗎？
7樓：歐陽俠
直接把熒光基團連線在一抗上確實是可以的，但是難就難在抗體與熒光基團的連線，每換一種抗體，就需要重新連線一次，這不僅麻煩，成本也就高了。
而抗體的fc段是不變的，也就是一抗的fc段不變，那麼只需要連線針對一抗fc段的二抗就足夠應付任何情況了，這樣就容易得多。
8樓：匿名使用者
補充，標記在二抗上面還會有一個熒光的放大效應
如何選擇一抗，二抗！如何選擇實驗需要的抗體！最優回答！
9樓：匿名使用者
如何選擇 一抗 二抗！ 你真是問對人了！我現在就告訴你如何選擇實驗需要的抗體！最優回答注意看哦！
1. 一抗選擇
（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、別名、亞型等資訊。
（2）確定您的實驗型別，elisa，wb，ihc，icc，或者是facs。biorbyt的每種抗體說明書都會列出抗體經驗證過適用的實驗型別，如果抗體說明書沒有提及的應用型別，並不意味著該抗體不適用於此種分析應用型別，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證。
（3）確定實驗樣本的種屬，human，mouse，rat等。我們的抗體說明書都列出該抗體驗證過的適用物種，可根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗需要的抗體。
（4）樣本抗原蛋白的結構性質。瞭解樣本抗原蛋白的結構性質有助於選擇最合適的抗體，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構象的改變，會影響抗體的免疫親和反應。
（5）單多克隆抗體的選擇。一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免）。
2. 二抗選擇
（1）種屬**。主要根據一抗種屬**而決定二抗**，如一抗是小鼠**，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標記物的選擇。有hrp、biotin、熒光素等標記物。免疫組化，wb二抗主要選擇hrp，biotin標記的二抗，而免疫熒光染色可按實驗需要選擇不同熒光素標記的二抗，如fitc、cy3、pe等。
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免疫熒光的一抗核二抗分別用什麼稀釋
10樓：匿名使用者
pbs稀釋.當然最好用封閉液直接稀釋,再加一點tritonx100效果好.
培養液成分太多了.而且固定之後細胞都死了,用培養液沒什麼意義,只要保證其ph等條件適合就好了.
抗體說明書上都會有推薦的稀釋倍數.上網查一下,有很多protocol.一般一比幾百到一萬都有,依抗體而定.可以4度過夜,這樣染色效果好.
二抗一般較便宜,一般1：50到1：200多.
免疫熒光染色和細菌培養哪個更準，免疫熒光染色的一抗，二抗分別用什麼稀釋？
細胞培養，方法見國家藥典。但是細胞培養耗時更長。免疫熒光染色的一抗，二抗分別用什麼稀釋？5 關於細胞免疫熒光染色的問題 1 你的二抗是用fitc標記的，為避免熒光分解，分裝及熒光顯微鏡觀察時均要避光 2 封片最好用甘油加0.5mmol l ph9.0 9.5的碳酸氫鹽緩衝液，後者能使玻片透明 3 關...
細胞免疫熒光失敗原因求教細胞免疫熒光
首先你應bai該確認老鼠是不是du轉基因老鼠，會不會有自zhi發熒光的產生 dao。其次，二專抗就是熒光染料，屬只要加了二抗，就會有熒光的產生，所以需要在加完二抗後用pbs洗5次，充分將多餘二抗洗掉，避免在拍片時產生躁點影響實驗結果。求助 細胞免疫熒光的詳細操作步驟 1，取出細胞爬片放到35mm或6...
免疫熒光二抗的選擇求教,請教免疫熒光雙標中熒光二抗的選擇是否合適
要是你要用的抗體不就行了，國產跟國外的差別也不是那麼大好不好？建議樓主先做試驗試試，個人覺得影響不會很大。只要fitc標記的羊抗鼠抗體是合格產品即可。經費有限的話，只要得到試驗結果不就行了。請教免疫熒光雙標中熒光二抗的選擇是否合適 一般來說,選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮 1.二抗應選用與使用...