1樓:南京金益柏生物科技****
包埋好的復標本用切片
制機切石蠟切片(5微米),並將蠟片貼附於多聚賴氨酸處理過的載玻片上。
經60°C烘片2-8小時(都試過,沒啥差別,但非實質性器官應適當延長時間)。
二甲苯i脫蠟30分鐘(若要保證脫蠟完全可將其加熱至40-60°C),二甲苯ii脫蠟10分鐘。
2樓:愛派尚飾品旗
勸集會遊行桌諦香菇忻
石蠟切片免疫熒光與免疫組化一抗濃度有區別嗎
3樓:北京索萊寶科技****
免疫熒光的一抗濃度一般高於免疫組化的一抗濃度,但是也要看具體情況:
因此免疫熒光一般採取二步法,而免疫組化中有biotin放大這一步。所以建議免疫熒光的時候重新摸索濃度,要是採用三步法可能不需要摸索了。另我們免疫熒光抗體一般用推薦濃度。
免疫熒光抗體濃度要根據免疫組化結果的強弱調整,如果較強,用相同濃度即可;如果組化陽性較弱,那麼做熒光時要加大抗體濃度。至於免疫組化的抗體是否能做免疫熒光,其實是由組織型別及標本的固定方式決定的。一般組化為石蠟切片,熒光為冰凍切片或細胞爬片。
如果組化和熒光用的是相同的標本,那麼抗體就能通用,畢竟組化和熒光的區別在於一抗的呈現方式,而非抗原抗體的結合。
石蠟切片能不能做免疫熒光
4樓:南京金益柏生物科技****
免疫熒光當然冰bai凍切片較好,du但石蠟切片同樣zhi可以做出來dao的。冰凍切片不需要固定,從版
而有效保護了抗原權的活性,如果是石蠟切片,可能損失了許多抗原,儘管有抗原修復,抗原修復主要機制是將因甲醛作用而導致的抗原活性封閉重新啟用,所以還是有影響,但一般來說應該可以通過這一步有效恢復,標本固定時間比較重要,時間越長,抗原修復時間和溫度都要增加。
其次是抗體的問題,可能要摸索一下濃度。
冰凍切片的缺點就是結構破壞厲害。而石蠟切片形態結構保持較好,因為有效的固定很重要。
如果有冰凍切片機,可以試一下冰凍切片,可能效果會理想一些的。
略知一些而已。
關於石蠟切片免疫熒光如何消除自發熒光
5樓:南京金益柏生物科技****
可以用遠紅外波長的熒光範圍內的二抗,在此範圍內基本看不到自發熒光的訊號;也可以用丙酮固定不用醛類物質。都可以減少自發熒光的產生
請教:肺組織石蠟切片的免疫熒光結果失敗原因
6樓:南京金益柏生物科技****
你這個可能原因有:
1 抗體濃度太大引起非特異著色----解決辦法:降低抗體濃度,可以先在組化上摸一下濃度(主要是一抗)。
2 **時間太長-----解決辦法:縮短**時間,我們一般ms範圍,dapi,200倍下我們是60ms左右(熒光顯微鏡,其他儀器時間不論)
3 蠟引起的背景----解決辦法:徹底脫蠟,每缸時間都要延長。
7樓:匿名使用者
幾點建議,希望有用:
1. dapi濃度降低,或時間縮短,或拍攝時注意調整,太強了。
2. 不知道有沒有摸索抗體的濃度和到底好不好用。取組織(包括陽性對照和肺組織)根據抗體說明書,摸合適濃度,另加上陰性對照(不加一抗)。
不怕麻煩的話還是建議做組化,先不做熒光,當然組化的呈色掌握不好的話,直接熒光也可以,也省得後期再調整濃度。
石蠟切片的自發熒光也是比較重的。但是感覺你的主要問題還在於抗體濃度和孵育時間沒有摸索好,包括dapi的孵育時間,一般3min就足夠了!
能夠做組織免疫熒光的抗體可以做細胞免疫熒光嗎 5
8樓:艾康生物
你好!你用的是單抗嗎?如果是單抗,他們會有說明書說上面是可適用的實驗範圍,那個是給他們驗證過的。
如果沒有,你也可以自己嘗試用一下,說不定可以用。但是也有可能結果要麼是不理想,要麼是沒結果。這個要看運氣了。
做實驗本身就有運氣成分在裡面的。
組織免疫熒光是用石蠟切片還是冰凍切片
9樓:南京金益柏生物科技****
二者應該都是可以的,具體要看自身的實驗條件哪個操作更方便以及抗體的性質。
看你的實驗要求,冰凍片要求較高(低溫環境,液氮,冰凍切片機,oct包埋劑等等),石蠟片的製作就比較簡單,試劑也較便宜。另外看你購買的抗體適用於哪種**
免疫組化的話,一般大都使用石蠟切片。免疫熒光染色的話,都可以的,冰凍切片比較容易操作,不需要修復;石蠟切片的話操作起來步驟比較多,相對來說比較複雜一點,而且還需要抗原的修復過程,再者就是你購買的抗體適合哪種切片,應該說明書上面會寫清楚的,祝你好運!
免疫熒光二抗的選擇求教,請教免疫熒光雙標中熒光二抗的選擇是否合適
要是你要用的抗體不就行了，國產跟國外的差別也不是那麼大好不好？建議樓主先做試驗試試，個人覺得影響不會很大。只要fitc標記的羊抗鼠抗體是合格產品即可。經費有限的話，只要得到試驗結果不就行了。請教免疫熒光雙標中熒光二抗的選擇是否合適 一般來說,選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮 1.二抗應選用與使用...
能夠做組織免疫熒光的抗體可以做細胞免疫熒光嗎
你好！你用的是單抗嗎？如果是單抗，他們會有說明書說上面是可適用的實驗範圍，那個是給他們驗證過的。如果沒有，你也可以自己嘗試用一下，說不定可以用。但是也有可能結果要麼是不理想，要麼是沒結果。這個要看運氣了。做實驗本身就有運氣成分在裡面的。能做免疫熒光的抗體可做免疫組化實驗嗎 免疫熒光也是組織切片，應該...
那個免疫熒光是怎麼回事，有懂的嗎
你好！免疫熒光是利來用抗原源抗體反應原理，bai 將抗原與抗體進行結合。通常 du是將抗原負zhi載在載玻片上dao，之後用抗體 一抗，可能是人的血清中存在的抗體 去進行孵育，這樣抗原抗體進行結合後，用熒游標記的抗樣本中抗體的二抗與其進行結合，這樣在熒光顯微鏡下，如果待檢測樣本含有抗體 一抗 那麼就...