1樓：艾康生物
你好！免疫熒光是利來用抗原源抗體反應原理，bai
將抗原與抗體進行結合。通常
du是將抗原負zhi載在載玻片上dao，之後用抗體（一抗，可能是人的血清中存在的抗體）去進行孵育，這樣抗原抗體進行結合後，用熒游標記的抗樣本中抗體的二抗與其進行結合，這樣在熒光顯微鏡下，如果待檢測樣本含有抗體（一抗），那麼就能發出熒光被我們用肉眼看到。
2樓：南京金益柏生物科技****
這個目的蛋白的抗體濃度是不是有點低了
或者抗原本身表達較低
感覺染色強度很弱
建議提高濃度試試
免疫熒光的圖是怎麼回事
3樓：南京金益柏生物科技****
這個目的蛋白的抗體濃度是不是有點低了
或者抗原本身表達較低
感覺染色強度很弱
建議提高濃度試試
免疫熒光是什麼？
4樓：匿名使用者
免疫熒光技術（immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
該技術的主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程式也還比較複雜。
熒光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性汙染，並且大多操作簡便，便於推廣。國外生產的tdm用試劑盒，有相當一部分即屬於此類，並且還有專供tdm熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產
免疫熒光的方法有什麼注意環節
5樓：南京金益柏生物科技****
1、冰凍切片製備：建議用新鮮組織，否則組織細胞內部結構破壞，易使抗原彌散。選用乾淨鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴重。
2、組織切片固定：切好片風乾後立即用冰丙酮等固定液進行固定 5-10 min，尤其要較長時間儲存的白片，一定要及時固定和適當儲存。
3、血清封閉：為防止內源性非特異性蛋白抗原的結合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗**一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時間是可以調整的，一般 10-30 min。
5、二抗孵育條件：二抗一般室溫或 37℃ 立即觀察，若將標本放在聚乙烯塑料袋中 4℃ 30 min-1h，具體時間需要摸索，而濃度一般有工作液，若是濃縮液還要摸索濃度，切記要避光反應。但在免疫熒光中我們一般先把二抗濃度和孵育時間先定下，然後去摸索一抗濃度和孵育時間。
最後，熒光素標記的二抗隨著儲存時間的延長，可能後有大量的遊離熒光素殘留，需要注意配製時小包裝和並進行適當的離心。
6、復染：目的是形成細胞輪廓，從而更好地對目標蛋白進行定位。一般常用 dapi 復染。
7、封片：為了長期儲存，我們一般用緩衝甘油等封片，此外還有專門的抗熒光萃滅封片液。避免產生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然後一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對面的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當發現液體接觸面在不斷彌散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產生氣泡。
8、切片清洗：為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色，所以適當地加強清洗（延長時間和增多次數）尤為重要，我一般在一抗孵育前的清洗是 3 min*3 次，而一抗孵育後的清洗均為 5 次*5 min。注意：
單獨沖洗，防止交叉反應造成汙染。溫柔沖洗，防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式；沖洗的時間要足夠，才能徹底洗去結合的物質。
pbs 的 ph 和離子強度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓，當時我買的抗體稀釋液偏酸，結果背景一片黃（未見特異性染色），建議 ph 在 7.4-7.
6 濃度是 0.01 m。（中性及弱鹼性條件（ph7-8）有利於免疫複合物的形成，而酸性條件則有利於分解；低離子強度有利於免疫複合物的形成，而高離子強度則有利於分解）
9、拍照：有條件的話最好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和溼度。使用熒光顯微鏡注意嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程式；應在暗室中進行檢查；防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡；檢查時間每次以1~2 h 為宜，超過 90 min，超高壓汞燈發光強度逐漸下降，熒光減弱；標本受紫外線照射 3~5 min 後，熒光也明顯減弱或褪色；激發光長時間的照射，會發生熒光的衰減和淬滅現象；所以最多不得超過 2~3 h；熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應集中檢查，以節省時間，保護光源。
天熱時，應加電扇散熱降溫，新換燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅後欲再啟用時，須待燈光充分冷卻後才能點燃。一天中應避免數次點燃光源。
關閉汞燈至少在開啟 15-30 分鐘後；標本染色後立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中 4℃ 儲存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發；使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油；電源最好裝穩壓器，否則電壓不穩不僅會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果。
共定位(免疫熒光)是什麼？
6樓：糟油酒丸
免疫熒光可以用於共定位，但也可以用於很多其他應用。共定位不能夠說是免疫熒光的主要用途。
一樓回答有助於理解共定位，但是「加上紅色/綠色熒光蛋白的標籤」這種說法並不是免疫熒光的做法。在免疫熒光中，與目標蛋白相結合的是帶有熒光分子基團的抗體，此種抗體雖然發熒光，但不稱為熒光蛋白。
另外，共定位不能夠用於證明相互作用，更不可能證明蛋白之間的共價結合。
共定位就如字面意思上所說的，只能夠表明蛋白a和b都在此細胞有表達，並且在同樣的細胞內位置/細胞器。
就好像你用gps看到，有兩個人a和b此時都在某市同一家咖啡廳內，並不能夠證明他們在幽會。但是如果說因為同時在一處這個事實而懷疑有姦情，也並不全是毫無道理，只是需要別的手段來證明罷了。
7樓：匿名使用者
共定位是說明兩個蛋白存在直接或間接相互作用的細胞學佐證（只是佐證，不是直接證據）。
如果蛋白a本身是定位於細胞內的x細胞器，而與蛋白b同時表達的時候蛋白a跟蛋白b一起定位到了y細胞器，那麼說明蛋白a和蛋白b是共定位的，也就是這兩個蛋白可能存在相互作用（只是可能）。
請選擇上面的推薦答案，是對的，回答的時候有些大意，沒看到「免疫」二字，這裡糾正一下之前的回答~~~
什麼是免疫熒光染色診斷
8樓：go不留痕跡
用於檢測或定位各種抗原，也可以與其他蛋白質結合，用於檢測或定位抗體。 用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞（或組織）化學技術。
原理：免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由於抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。
免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合後，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。
該技術的主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程式也還比較複雜。
9樓：匿名使用者
近年來，熒光顯微鏡技術特別是免疫熒光技術得到了飛速發展，作為一種研究方法或實驗手段，已被廣泛地應用於醫學科學領域內各種基礎理論研究和臨床診斷。
免疫熒光染色診斷，齊氏生物認為 查的應該是免疫方面的檢查，一般是臨床用於疾病的診斷。
什麼是免疫熒光染色診斷？
10樓：匿名使用者
這個資料應該可以幫你。
11樓：稽深樸茵
近年來，熒光顯微鏡技術特別是免疫熒光技術得到了飛速發展，作為一種研究方法或實驗手段，已被廣泛地應用於醫學科學領域內各種基礎理論研究和臨床診斷。
免疫熒光染色診斷，齊氏生物認為
查的應該是免疫方面的檢查，一般是臨床用於疾病的診斷。
做免疫熒光出現了細胞核外的非特異性染色，是怎麼回事
12樓：治敬雜旁
如果你的**和操作過程都是一樣，而一組沒訊號、另一組卻有訊號，那出現差異的原因就應該是一抗的反應過程（不知你的顯色過程是怎樣的）；而你要是能確定看到的結果不是基因表達的實際情況，即你所說的非特異染色，那就應該是抗體的原因，單就非特異染色而言，可能是你的抗體稀釋度不夠，可以嘗試倍增稀釋比，最好是查詢使用與你用相同抗體的相關文獻的稀釋比，或直接諮詢公司的技術支援；另外一個原因可能是你的抗體不好使，由於你的另一組抗體沒有提供陽性訊號，致使你的體系沒有可靠的對照，建議你選擇一個陽性對照，比如腫瘤中常用的ki67，這樣可以知道你的操作步驟是否存在問題。
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