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瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。
瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的dn**段,其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低,但它製備容易,分離範圍廣,尤其適於分離大片段dna。普通瓊脂糖凝膠分離dna的範圍為0.2-20kb,利用脈衝電泳,可分離高達10^7bp的dn**段。
瓊脂糖凝膠的特點
天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約佔80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由於這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象,加之硫酸根可與某些蛋白質作用而影響電泳速度及分離效果。因此,目前多用瓊脂糖為電泳支援物進行平板電泳,其優點如下。
(1)瓊脂糖凝膠電泳操作簡單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進行電泳。
(2)瓊脂糖凝膠結構均勻,含水量大(約佔98%~99%),近似自由電泳,樣品擴散較自由電流,對樣品吸附極微,因此電泳圖譜清晰,解析度高,重複性好。
(3)瓊脂糖透明無紫外吸收,電泳過程和結果可直接用紫外光燈檢測及定量測定。
(4)電泳後區帶易染色,樣品極易洗脫,便於定量測定。製成幹膜可長期儲存。
目前,常用瓊脂糖作為電泳支援物,分離蛋白質和同工酶。將瓊脂糖電泳與免疫化學相結合,發展成免疫電泳技術,能鑑別其他方法不能鑑別的複雜體系,由於建立了超微量技術,0.1ug蛋白質就可檢出。
瓊脂糖凝膠電泳常見問題有哪些
用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品,如大分子核酸 病毒等,一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳常見為題都有哪些?dna帶模糊 dna降解 瓊脂糖凝膠電泳試驗中要避免核酸酶汙染 電泳緩衝液陳舊 電泳緩衝液多系使用後,離子強度降解,ph值上升,緩衝能力減弱...
瓊脂糖凝膠電泳跑完dna條帶顏色淺怎么回事
考慮以下因素 1.核酸染料是否足量2.瓊脂糖凝膠以及電泳液是否為新制3.dna的量是否足夠 瓊脂糖凝膠電泳跑的dna為什麼會拖尾 可能的原因 上樣量太大 上樣時間太長 dna不夠純,含有蛋白質雜質 dna的分子量大小不一致 膠中有核酸酶汙染,dna在移動的過程中,發了斷裂 膠的濃度不均一 等等。dn...
目前我國常用的混凝劑有幾種,各有何優缺點
我國目前常用的混凝劑有 鋁系 硫酸鋁 明礬 聚合氯化鋁 pac 聚合硫酸鋁 pas 鐵系 三氯化鐵 硫酸亞鐵 聚合硫酸鐵 pfs 聚合氯化鐵 pfc 有機高分子混凝劑 聚丙烯醯胺 pam 優缺點 硫酸鋁。優點是,較低,使用便利,混凝效果較好,不會給處理後的水質帶來不良影響。缺點是,當水溫低時硫酸鋁水...