1樓:匿名使用者
用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳常見為題都有哪些?
dna帶模糊
dna降解:瓊脂糖凝膠電泳試驗中要避免核酸酶汙染
電泳緩衝液陳舊:電泳緩衝液多系使用後,離子強度降解,ph值上升,緩衝能力減弱,從而影響電泳實驗,建議經常更換電泳緩衝液。
所用電泳條件不合適:電泳時電壓不應超過20v/cm,溫度<30°C;巨大dna鏈電泳,溫度應該<15°C;檢車所有電泳緩衝液是否有足夠的緩衝能力
dna上揚量過多:應減少凝膠中dna上樣量。
dna樣含鹽量過高:電泳前通過乙醇沉澱去除過多的鹽。
有蛋白汙染:電泳前酚抽提去除蛋白
不規則dna帶遷移
對於λ/hindiii片段cos位點復性:電泳前於65°C加熱dna5分鐘,然後在冰上冷卻5分鐘。
電泳條件不合適:電泳電壓不超過20v/cm;溫度<30°C;經常更換電泳緩衝液。
dna變性:以20mm naci buffer稀釋dna,電泳前勿加熱。
帶弱或無dna帶
dna的上樣量不夠:增加dna的上樣量;聚丙烯醯胺凝膠電泳比瓊脂糖凝膠電泳靈敏度稍高,上樣量可適當降低。
dna降解:避免dan的核酸酶汙染
dna走出凝膠:縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度。
對於eb染色的dna,所用光源不合適:應用短波長(254mm)的紫外光源
dna帶缺失
小dna帶走出凝膠:縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度。
分子大小相近的dna帶不易分辨:增加電泳時間,核准正確的凝膠濃度。
dna變性:電泳前請勿高溫加熱nda鏈,以20mm naci buffer稀釋dna
dna鏈巨大,常規凝膠電泳不合適:在脈衝凝膠電泳上分析。
綜上所訴,瓊脂糖凝膠電泳實驗需注意以下幾點:
1.體系配製時候最關鍵的幾個試劑一定要確定它們還有效、或者還沒被汙染:引物,酶,超純水。
這些東西最好自己收好,寫上個人的名字放好,冰盒上記得帶上橡皮筋,這樣就不會因為別人翻冰箱時候把你的冰盒碰散了,試劑都碰掉。否則,你的試劑被汙染了,到時候陰性對照狂出條帶,再去找汙染源很麻煩。而且配置體系時候要注意保持實驗區的乾淨,事先可用小噴壺進行酒精噴霧,固定空氣中的dna,而且全程要戴手套,避免汙染體系。
2.pcr體系要摸準,最好用人家都做得很多的老體系來上手。
3.要想得到漂亮的電泳圖,可以在pcr開始時候就把膠倒上(前提是你的pcr總時間在1.5小時左右,並且1.
5小時候之後你還在實驗室。),讓凝膠涼著,這樣凝膠的上樣孔會比較規則,膠體裡面的其本身的孔徑也會較規則。如果你要第二天再跑膠,千萬記得把pcr完畢的樣本放入4°C儲存。
第二天做時候建議把膠涼上25分鐘左右。
4.瓊脂糖凝膠電泳上樣時候建議使用排槍上樣,不僅快速而且樣本加到膠孔裡的速度一致。當然,排槍上樣最好選用進口槍頭,國產槍頭就不要想了。
5.不管電泳室使用的頻率高還是低,我都建議每次瓊脂糖凝膠電泳時候更換電泳液,避免出現「^」形條帶。
瓊脂糖凝膠電泳跑完dna條帶顏色淺怎么回事
考慮以下因素 1.核酸染料是否足量2.瓊脂糖凝膠以及電泳液是否為新制3.dna的量是否足夠 瓊脂糖凝膠電泳跑的dna為什麼會拖尾 可能的原因 上樣量太大 上樣時間太長 dna不夠純，含有蛋白質雜質 dna的分子量大小不一致 膠中有核酸酶汙染，dna在移動的過程中，發了斷裂 膠的濃度不均一 等等。dn...
瓊脂糖電泳有何優缺點
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品，如大分子核酸 病毒等，一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的dn 段，其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低，但它製備容易，分離範圍廣，尤其適於分離大片段dna。普通瓊脂糖凝膠分離dna的範圍...
說說學習圍棋有哪些常見問題
圍棋考級考段都是業餘的級數和段位。先考級 再考段。級數中9級最低 1級最高，可以跳著考。到1級 2級時可以考段。段位中1段最低 5段最高。段位不能跳。如何考職業段位，或者獲得業餘更高段位，成為世界冠軍。這種問題很難解釋。可以報名時諮詢老師。圍棋最難是形勢判斷與定型，正所謂低手在中盤，高手看官子 圍棋...