1樓:du知道君
由於布魯氏菌培養的營養條件苛刻而且時間長,所以布魯氏菌病的診斷以血清學診斷為主。其原理主要是根據相應抗原抗體可以在體外發生特異性結合並呈現可見反應,用已知抗原(或抗體)檢測體液中未知的抗體(或抗原)。
虎紅平板凝集試驗(rbpt)靈敏度高,**便宜,操作方便,檢測快速,適於群體布魯氏菌病的普查。在國際**中是牛、羊、豬布魯氏菌病檢測的指定試驗,在我國也用於人布魯氏菌病監測的初篩。
檢測布魯氏菌病所用的虎紅平板凝集抗原是用抗原性良好的布魯氏菌菌株經培養,滅活,離心收集菌體用虎紅染料染色後,懸浮於乳酸緩衝液中製備而成。
試驗原理:虎紅平板凝集試驗又稱為班氏孟加拉紅平板凝集試驗。由於所用的抗原是酸性(ph3.
6-3.9)帶色的抗原,該抗原與被檢血清作用時能抑制血清中的igm類抗體的凝集活性、檢查的抗體是igg類,因此提高了反應的特異性。
虎紅平板凝集試驗具體方法如下:
一、材料準備
1、虎紅平板凝集抗原、標準陽性血清、陰性血清由制標單位提供,按說明書使用。
2、被檢血清應新鮮,無明顯蛋白凝塊,無溶血和無腐敗氣味。
3、潔淨的玻片或玻璃板,其上劃分成4cm2的方格。
4、吸管或移液器,適於滴加0.03ml液體。
5、牙籤、混合棒或火柴桿,供攪拌用。
二、操作方法
1、實驗前,應將血清和抗原在室溫放置30-60min。
2、將玻璃板上各格標記被檢血清號,然後加相應被檢血清0.03ml。
3、在被檢血清旁滴加虎紅平板凝集抗原0.03ml。
4、用牙籤類小棒攪動血清和抗原,使之充分混合,在5分鐘內觀察結果。
5、每次試驗應設陰性血清、陽性血清對照。
三、結果判定
1、在陰、陽性血清對照成立的條件下,方可對被檢血清進行判定。
2、受檢血清在4min內出現肉眼可見凝集現象者判為陽性(+),無凝集現象,呈均勻粉紅色者判為陰性(-)。
四、方法評價
1、虎紅平板凝集試驗檢測布魯氏菌病,方法簡便、快速、容易操作,適於基層大面積檢疫;
2、該方法敏感性較好,檢查牛的陽性率稍高於綿羊、山羊。
3、因為在酸性環境下igm活性受抑,該法主要是檢查igg類凝集抗體,所以特異性較好,與補體結合試驗、二巰基乙醇(2-me)試驗和抗球蛋白試驗有較高的吻合率。
4、該法受制備抗原時條件影響較大,所以每批製備抗原應予以檢查、標化方可應用。
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