1樓：
trizol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有rnase抑制劑可保持rna的完整性。在加入氯仿離心後，溶液分為水相和有機相，rna在水相中。取出水相用異丙醇沉澱可**rna；用乙醇沉澱中間層可**dna；用異丙醇沉澱有機相可**蛋白質。
2樓：匿名使用者
我做過，把你不懂的哪些步驟補充一下吧。
求trizol提取rna的詳細步驟
3樓：6月時光
厚百提供：
1、在提取組織rna時，每50～100mg組織用1ml trizol試劑對組織進行裂解；提取細胞rna時，先離心沉澱細胞，每5-10
╳106個細胞加1ml trizol後，反覆用槍吹打或劇烈振盪以裂解細胞。
2、將組織或細胞的trizol裂解液轉入ep管中,在室溫15~30c下放置5分鐘；在ep管中，按照每1ml
trizol加0.2ml氯仿的量加入氯仿，蓋上ep管蓋子，在手中用力**15秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3分鐘後，12000g（2℃～8℃）離心15分鐘。
3、取上層水相置於新ep管中,按照每1ml
trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10分鐘。
4、按照每1ml
trizol加1ml 75%乙醇進行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5分鐘，棄上清；讓沉澱的rna在室溫下自然乾燥；用rnase-free
water
溶解rna沉澱。
ps:在收集到生物材料之後，最好馬上進行rna製備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍後，儲存於-80℃冷凍櫃。
在製備rna時，將儲存於冷凍櫃的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免rnase的作用。
trizol法提取流感病毒rna每個步驟詳細注意事項？
4樓：狂飛陽
三、trizol法提取法（這是提禽流感病毒的步驟，供參考）
trizol法適用於人類、動物、植物、微生物的組織或培養細菌，樣品量從幾十毫克至幾克。
1、取雞胚尿囊液，加入5-10倍體積trizol液，混勻；
2、室溫放置5分鐘，然後以每1ml trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，蓋緊離心管，用手劇烈搖盪離心管15秒；
3、取上層水相於一新的離心管，按每ml trizol液加0.5ml異丙醇的比例加入異丙醇，室溫放置10分鐘，12000g離心10分鐘；
4、棄去上清液，按每ml trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，混勻，4℃下7500g離心5分鐘；
5、重複第4步；
6、小心棄去上清液，然後室溫乾燥5-10分鐘，注意不要乾燥過分，否則會降低rna的溶解度；
7、然後將rna溶於水中，放置10分鐘。
[注意]
1、整個操作要帶口罩及一次性手套，並儘可能在低溫下操作，低溫可以避免脆弱的rna被降解；
2、加氯仿前的勻漿液可在-70℃儲存一個月以上，rna沉澱在70%乙醇中可在4℃儲存一週，-20℃儲存一年。
rna提取原理
5樓：追尋複製者
rna抽取一般使用trizol法抽來提:
trizol是一種總自rna抽提試劑，內含異bai硫氰酸胍等物質，能du
迅速裂解細zhi胞，抑制細胞釋
dao放出的核酸酶活性。目前常用trizol法進行提取組織或細胞中的rna。
trizol作用原理:
在勻質化或溶解樣品中，trizol試劑可保持rna的完整性，同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後，裂解液分層成水相和有機相。rna存在於水相中。
水相轉移後，rna通過異丙醇沉澱**。移去水相後，用乙醇可從中間相沉澱得到dna，加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。
6樓：匿名使用者
dna不是單獨存在於細胞中的，是染色體
蛋白質是有機物沒錯，但是它是複雜的有機物，有親水基，疏水基，所以不是只要是有機物就溶於有機溶劑的
分層看的是密度，不是分子量的大小
7樓：《不能說的祕密
蛋白質在有機溶劑中復變性所以形成
制沉澱，中間那白bai色的是變性du的蛋白質。
我們做過zhi提取dna的實驗，dao用的是飽和酚提取的，後來又用了氯仿的。dna、rna很容易被分解，特別是rna，rna酶到處都有，我們在做dna提取時用到edta抑制dna酶的活性，防止被降解。
分層不是看分子的大小的，看它在離心力的作用下運動的快慢，一般密度大的運動的快一些在下面。
下層有機相中有一些脂類
rna提取過程中的關鍵步驟及注意事項有哪些
8樓：du知道君
注意槍頭管子裡的rna酶，注意你唾沫星子**上存在的rna酶，注意各種試劑中存在的rna酶。 重要的事情說三遍。 剩下就是最後一步吸乾點，吹乾點，但別吹太過了。
9樓：嵇來福胡云
細胞中的rna主要有三類：rrna約佔80％－85％，trna和核內小分子rna約佔10%-15%，mrna約佔1%-5%，由於rrna佔絕大多數，因此我們用瓊脂糖凝膠電泳可以看到的即是rrna，它也有三種型別：28s，18s，5s。
所以我們看到的也應該是三條帶，而且28s的亮度為18s的兩倍。這樣的rna才可以用來建庫。
在rna的提取時，一定要注意rnase的汙染，因rna極易被rnase的降解，操作時應儘量少說話，並在潔淨的環境中操作，主要防止手、唾液和空氣中rnase的汙染；另一方面使用的所有玻璃儀器、移液器、吸頭和離心管都用0.5%depc溶液處理過夜,然後高壓滅菌15分鐘.但對於滅菌的一次性使用的塑料製品基本上無rnase,，可以不經處理直接用於提取rna，實驗室用的普通玻璃器皿和塑料製品經常有rnase汙染，使用前必須180度幹烤8小時或更長時間（玻璃器皿）或用氯仿沖洗（塑料製品），另外，由於材料不同，機體內含有的糖、酚類物質不一樣，因此材料不同用的方法也應該不一樣。
下面是兩種提取方法，第一種適用於嫩組織或動物組織的總rna的提取，第二種適用於老組織的提取。
試劑：提取緩衝液，kac(5m),
異丙醇，無水乙醇，depc水
儀器：離心機，恆溫水浴鍋，研缽
方法一動物、植物（嫩葉）的總rna分離
大約2克植物組織或動物組織用液氮研磨
↓加5mltrizol裂解液
↓12000rpm
，4度，10分鐘
↓加入1ml氯仿
↓劇烈振盪15秒，室溫溫育2-3分鐘
↓室溫離心10分鐘，8000rpm
↓取上清，加入等體積的異丙醇，15-30度放置10分鐘。
↓12000g離心10分鐘
↓棄上清，加入10ml75%灑精洗沉澱。
↓2-8度下，不超過7500g離心5分鐘
↓棄上清，乾燥沉澱10分鐘
↓用depc水溶。
方法二、植物老葉、老根或多糖含量高的材料的總rna分離
1g組織液氮研磨，加入6ml提取緩衝液
↓2min振盪
↓65℃，20min
↓加入1.5mlkac
↓混勻，冰浴20min
↓8000rpm,4℃,15min
取上清，加入0.6倍異丙醇，-20℃，1小時（或室溫15-20min）
↓12000rpm,4℃,15min
↓75%乙醇，12000rpm,20℃,5min
↓晾乾，溶60uldepc水，15min
↓12000rpm,4℃,5min,
上清即為rna。
trizol提取rna
10樓：烏幻絲
造成od260/od280偏低有兩種情況：
1.dna 汙染
魚類肝臟的dna含量比較多。像你提到的加入異丙醇後又大量的白色絮狀沉澱出現，極有可能是dna沒有去除乾淨。
造成dna汙染的原因主要是trizol加入氯仿時混勻力度不夠，造成dna未被完全萃取。建議氯仿和trizol混勻時加大**力度。
2.蛋白質汙染
吸取上清時吸取的上清過多，中間層的蛋白質。造成最後的蛋白質汙染。嚴重影響提取rna的純度。
其實現在提取rna，建議不要用trizol。trizol雖然是最經典的方法，但也存在著有機抽提（毒性較大），耗時較長，對操作者要求高等缺點。現行的矽膠柱能很好的解決這個問題。
市場上qiagen， omega的產品都不錯。qiagen的**稍高。
11樓：浙大阿米巴
材料的蛋白太多了自然提取的時候殘餘的蛋白也多啊。
12樓：匿名使用者
不同組織的蛋白含量和性質都是不同的，如果有蛋白沉澱，重新用氯仿抽提一次就還是了
13樓：***
重複幾次除蛋白的步驟。
rna提取的關鍵步驟是？？？
14樓：匿名使用者
我只知道dna的
析出含dna的黏稠物：蒸餾水300ml，逆時針方向攪拌，緩慢攪拌..朝一個方向..避免dna折斷
15樓：原亮不原諒
原料要新鮮，要含有rna的活細胞，不要用一些不含有rna的，如血紅細胞什麼的！
16樓：匿名使用者
帶手套和口罩，並且要勤換手套，徹底清潔工作區域，避免汙染。儘量使用一次性的rnase free的耗材。使用rnase free的dnase來清除dna汙染。
所有試劑嚴格避免汙染。
trizol法提取rna分成的三相分別是什麼
17樓：衡順慈蒼洮
博凌科為總rna提取試劑盒(trizol法)使用了經典的trizol法總rna提取試劑，並增添了提取rna過程中所需要的其它4種組分，1.氯仿；2.異丙醇；3.rnase-free
h2o；4.75%乙醇。
提取rna時，細胞裂解後加入氯仿的原因是什麼
就那植物 來說吧！原理是一致的。方法不同。1植物組織提取基因組dna 一 材料 幼嫩葉子。二 裝置 移液器，冷凍高速離心機，臺式高速離心機，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管 有蓋 及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。三 試劑 1 提取緩衝液 100mmol l tris cl,ph8.0,...
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