1樓：匿名使用者
就那植物
來說吧！原理是一致的。方法不同。
1植物組織提取基因組dna
一、材料
幼嫩葉子。
二、裝置
移液器，冷凍高速離心機，臺式高速離心機，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。
三、試劑
1、提取緩衝液ⅰ：100mmol/l tris·cl, ph8.0, 20mmol/l edta, 500mmol/l nacl, 1.5% sds。
2、提取緩衝液ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸鈉，6.0gpvp，240ul巰基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 rnasea母液
5、其它試劑：液氮、異丙醇、te緩衝液，無水乙醇、70%乙醇、3mol/l naac。
四、操作步驟：
1. 在50ml離心管中加入20ml提取緩衝液ⅰ, 60℃水浴預熱。
2. 幼苗或葉子5-10g, 剪碎, 在研缽中加液氮磨成粉狀後立即倒入預熱的離心管中, 劇烈搖動混勻, 60℃水浴保溫30-60分鐘(時間長,dna產量高), 不時搖動。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 顛倒混勻(需帶手套, 防止損傷**)，室溫下靜置5-10分鐘, 使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。
4. 室溫下5000rpm離心5分鐘。
5. 仔細移取上清液至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫放置片刻即出現絮狀dna沉澱。
6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml te。用鉤狀玻璃棒撈出dna絮團,在乾淨吸水紙上吸乾,轉入含te的離心管中,dna很快溶解於te。
7. 如dna不形成絮狀沉澱,則可用5000rpm離心5分鐘, 再將沉澱移入te管中。這樣收集的沉澱,往往難溶解於te,可在60℃水浴放置15分鐘以上，以幫助溶解。
8. 將dna溶液3000rpm離心5分鐘, 上清液倒入乾淨的5ml離心管。
9. 加入5μl rnasea(10μg/μl), 37℃ 10分鐘, 除去rna(rna對dna的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。
10. 加入1/10體積的3mol/l naac及2×體積的冰乙醇,混勻,-20℃放置20分鐘左右,dna形成絮狀沉澱。
11. 用玻棒撈出dna沉澱,70%乙醇漂洗,再在乾淨吸水紙上吸乾。
12. 將dna重溶解於1ml te, -20貯存。
13. 取2μl dna樣品在0.7% agarose膠上電泳, 檢測dna的分子大小。同時取15μl稀釋20倍, 測定od260/od280, 檢測dna含量及質量。
[注意] 5g樣品可保證獲得500μg dna, 足供rflp、pcr等分析之用。
提rna時加完氯仿忘記靜置會怎樣
2樓：匿名使用者
提rna時加完氯仿忘記靜置會不分層。
氯仿是分子量比較大的有機溶劑，在提取rna時氯仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離。提rna時加完氯仿靜置時間短會導致分層不明顯，忘記靜置會不分層。
提rna時trizol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內含物，同時因含有rnase抑制劑可保持rna的完整性，在加入氯仿離心後，溶液分為水相和有機相，rna在水相中，取出水相用異丙醇沉澱可**rna；用乙醇沉澱中間層可**dna；用異丙醇沉澱有機相可**蛋白質。
rna提取原理
3樓：追尋複製者
rna抽取一般使用trizol法抽來提:
trizol是一種總自rna抽提試劑，內含異bai硫氰酸胍等物質，能du
迅速裂解細zhi胞，抑制細胞釋
dao放出的核酸酶活性。目前常用trizol法進行提取組織或細胞中的rna。
trizol作用原理:
在勻質化或溶解樣品中，trizol試劑可保持rna的完整性，同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後，裂解液分層成水相和有機相。rna存在於水相中。
水相轉移後，rna通過異丙醇沉澱**。移去水相後，用乙醇可從中間相沉澱得到dna，加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。
4樓：匿名使用者
dna不是單獨存在於細胞中的，是染色體
蛋白質是有機物沒錯，但是它是複雜的有機物，有親水基，疏水基，所以不是只要是有機物就溶於有機溶劑的
分層看的是密度，不是分子量的大小
5樓：《不能說的祕密
蛋白質在有機溶劑中復變性所以形成
制沉澱，中間那白bai色的是變性du的蛋白質。
我們做過zhi提取dna的實驗，dao用的是飽和酚提取的，後來又用了氯仿的。dna、rna很容易被分解，特別是rna，rna酶到處都有，我們在做dna提取時用到edta抑制dna酶的活性，防止被降解。
分層不是看分子的大小的，看它在離心力的作用下運動的快慢，一般密度大的運動的快一些在下面。
下層有機相中有一些脂類
rna提取的時候無水乙醇，75%乙醇，氯仿有哪些作用
6樓：北京索萊寶科技****
氯仿: rna脫離dna及蛋白，從混合液中層析到水相.水相中的rna可用異丙醇沉澱濃縮.
接著用異丙醇進行二次沉澱，隨後用乙醇洗滌沉澱，可去除所有殘留的蛋白質和無機鹽. rna樣品中如果含有無機鹽, 有可能對後續實驗操作中的一些酶促反應產生抑制作用。
7樓：夏侯雪經霜
可以。因為提取原理是用氯仿萃取rna，而rna不溶於酒精，但氯仿和酒精胡溶。可行的辦法是用大量的氯仿萃取，減少酒精的干擾，最後再用異丙醇沉澱。
請教一下在提取RNA時加入乙醇是加冷凍的效果好還是加常溫的效果好啊
通常我們會加2.5倍體積的放在冰上的無水乙醇，再加十分之一體積的3m醋酸鈉 ph5.2 放到 20 過夜沉澱。注意rna容易降解，要用dnase rnase free的槍頭及離心管。當然是加冷凍的啊，提取rna時加乙醇無非兩種情況，一是加無水乙醇沉澱rna，二是加75 乙醇洗滌rna，由於rna易降...
Triozl大量提取RNA，該加氯仿時加成無水乙醇，還有的救嗎
可以。因為提取原理是用氯仿萃取rna，而rna不溶於酒精，但氯仿和酒精胡溶。可行的辦法是用大量的氯仿萃取，減少酒精的干擾，最後再用異丙醇沉澱。rna提取的時候無水乙醇，75 乙醇，氯仿有哪些作用 氯仿 rna脫離dna及蛋白，從混合液中層析到水相.水相中的rna可用異丙醇沉澱濃縮.接著用異丙醇進行二...
提取rna時,depc水要高壓滅菌之後使用嗎
先泡depc,然後放在盒子裡消毒,注意戴手套,無接觸,然後放在超淨臺使用,直接高壓滅菌,不先泡depc,有一定的風險,就看你的運氣了,運氣好的話,也沒問題 rna提取一定要用depc處理嗎 也不能太快,將tips裝入用氯仿擦淨,或是無水酒精擦淨的盒子,把tips的水分烘乾,搖床專過屬夜,轉速使液體可...