果膠酶的檢測方法,果膠酶活力測定的國家標準方法是什麼？

1樓：匿名使用者

參見國家標準方法：果膠酶活力測定方法（qb 1502-1992) ，但是該方法不太方便，掌握不好的話，偏差很大，主要是注意酶反應不要過頭，否則測定的資料偏低。dns法比較常用，它是用3,5-二硝基水楊酸做顯色劑，測定果膠酶與果膠反應生成的還原糖的量，也要注意反應不要過頭。

還有脫膠法，它是測定果膠酶對果膠粘度的降低速度。

果膠酶活力測定的國家標準方法是什麼？ 30

2樓：曾經最美

4.2 果膠酶活力測定

4.2.1 原理

果膠酶水解果膠,生成半乳糖醛酸。半乳糖醛酸具有還原性糖醛基,可用次亞碘酸法定量測定,以此來表示果膠酶的活性。

4.2.2 試劑和溶液

a.果膠粉(sigma公司出品) 10g／l水溶液

稱取果膠粉1.0000g,精確至0.0002g,加水溶解,煮沸,冷卻。

如有不溶物則需進行過濾。ph至3.5,用水定容至100ml,在冰箱中貯存備用。

使用時間不超過三天；

b.硫代硫酸鈉標準溶液c(na2s2o3)＝0.05mol／l 按gb 601配製與標定 0.1mol／l溶液。使用時準確稀釋一倍；

c.碳酸鈉溶液c(1／2na2co3)＝1mol／l 按gb 601配製；

d.碘標準溶液c(1／2i2)＝0.1mol／l 按gb 601配製與標定,貯存於棕色瓶中；

e.硫酸溶液c(1／2h2so4)＝2mol／l 取濃硫酸(d＝1.84)5.6ml,緩慢加入適量水中,冷卻後用水定容至100ml,搖勻；

f.可溶性澱粉指示液(10g／l) 按gb 603配製；

g.0.1mol／l檸檬酸—檸檬酸鈉緩衝液(ph＝3.5)

甲液稱取檸檬酸(c6h8o7·h2o)21.01g,用水溶解並定容至1000ml；

乙液稱取檸檬酸三鈉(c6h5na3o7·2h2o)29.41g,用水溶解並定容至1000ml；

取甲液140ml、乙液60ml,混勻,緩衝液的ph應為3.5(用ph計除錯)。

4.2.3 儀器

a.比色管 25ml；

b.恆溫水浴 50±0.2℃；

c.容量瓶 25ml、50ml、100ml、200ml、250ml；

d.碘量瓶 250ml；

e.吸管 1ml、5ml；

f.滴定管 25ml。

4.2.4 試驗程式

4.2.4.1 製備酶液

a.固體酶用已知重量的50ml小燒杯,稱取樣品1.0000g,精確至0.

0002g,以少量檸檬酸—檸檬酸鈉緩衝液(ph＝3.5)溶解,並用玻璃棒搗研,將上清液小心傾入適當的容量瓶中,沉渣再加少量緩衝液,反覆搗研3～4次,最後全部移入容量瓶,用緩衝液定容,搖勻,以四層紗布過濾,濾液供測試用；

b.液體酶準確吸取濃縮酶液1.00ml於一定體積的容量瓶中,用檸檬酸—檸檬酸鈉緩衝液(ph＝3.5)稀釋定容；

c.固體酶或濃縮酶液均須按附錄a要求,準確稀釋至一定倍數,酶液濃度應控制在消耗0.05mol／l硫代硫酸鈉標準溶液(a－b)之差在0.

5～1.0ml範圍內。必要時可先做預備試驗。

4.2.4.2 測定

a.於甲、乙兩支比色管中,分別加入10g／l果膠溶液5ml,在50±0.2℃水浴中預熱5～10min；

b.向甲管(空白)中加檸檬酸—檸檬酸鈉緩衝液(ph＝3.5)5ml；乙管(樣品)中

加稀釋酶液1ml、檸檬酸—檸檬酸鈉緩衝液(ph＝3.5)4ml,立刻搖勻,計時。在此溫度下準確反應0.5h,立即取出,加熱煮沸5min終止反應,冷卻；

c.取上述甲、乙管反應液各5ml放入碘量瓶中,準確加入1mol／l碳酸鈉溶液1ml、0.1mol／l碘液5ml,搖勻,於暗處放置20min；

d.取出,加入2mol／l硫酸溶液2ml,用0.05mol／l硫代硫酸鈉標準溶液滴定至淺黃色,加澱粉指示液3滴,繼續滴定至藍色剛好消失為其終點,記錄甲管(空白)、乙管(樣品)反應液消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積。

同時作平行樣品測定。

4.2.5 試驗結果的計算

1g酶粉或1ml酶液在50℃、ph3.5的條件下,1h分解果膠產生1mg半乳糖醛酸為一個酶活單位。

10x＝(a－b)×c×0.51×194.14×n×—————＝(a－b)×c×n×396.05 .......(1)

5×1×0.5

式中x——樣品的酶活力,u／g(u／ml)；

a——空白消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積,ml；

b——樣品消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積,ml；

c——硫代硫酸鈉標準溶液的濃度,mol／l；

0.51——1毫摩爾硫代硫酸鈉相當於0.51毫摩爾的遊離半乳糖醛酸；

194.14——半乳糖醛酸的毫摩爾質量,mg；

n——酶液稀釋倍數；

10——反應液總體積,ml；

5——滴定時取反應混合物的體積,ml；

1——反應時加入稀釋酶液的體積,ml；

0.5——反應時間,h。

所得結果應表示至整數。

注：果膠暫定用sigma公司產品為標準底物。若購不到,使用其他廠產品時, 必須作對照試驗。

4.2.6 結果的允許差

平行試驗,滴定時消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積(毫升)不得超過0.05ml。

果膠酶測試標準

3樓：匿名使用者

果膠酶活性的檢測

[目的]

本檢測方法是用來果膠酶的催化活性。本方法適用於各種固體和液體果膠酶製劑。

[說明]

本方法適合於果膠酶的質量分析和質量控制領域。但不是本公司產品及其它公司產品的絕對活力的**，而各種酶製劑的最終的酶活力在良好的實驗操作下仍可發揮出更好的催化活力。

[原理]

果膠物質主要存在於植物初生壁和細胞中間，果膠物質是細胞壁的基質多糖。果膠包括兩種酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三種中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果膠酶本質上是聚半乳糖醛酸水解酶，果膠酶水解果膠主要生成β-半乳糖醛酸,可用次碘酸鈉法進行半乳醛酸的定量,從而測定果膠酶活力。

[果膠酶活力單位定義]

1g(或1ml液體酶)酶粉,於50.0℃、ph3.5條件下,每分鐘催化果膠水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量為一個活力單位。

1. 試劑和儀器

*本標準所使用所有的試劑若無任何說明，均為分析純

1.1 醋酸

1.2 碘

1.3 碘花鉀

1.4 濃硫酸

1.5 果膠（sigma公司）

1.6 硫代硫酸鈉

1.7 碳酸鈉

1.8 可溶性澱粉

1.9 水浴鍋

1.10 碘量瓶

2. 試劑的製備

2.1 ph3.5的酸水

用醋酸將蒸餾水調至3.5

2.2 1%果膠溶液：

準確稱取分析純果膠1g，用酸水溶解煮沸，冷卻後過濾，定至100ml。

2.2 0.1n碘液：

準確稱取碘化鉀5g，用蒸餾水溶解後，加入2.54g碘，溶解後定容至100ml。

2.3 0.025mol/l硫代硫酸鈉：

準確稱取6.2g硫代硫酸鈉，加蒸餾水後定容至1l

2.4 0.5%可溶性澱粉指示劑：

準確稱取可溶性澱粉0.5g放入沸水中消煮至透明。

2.5 1m碳酸鈉溶液：

準確稱取10.6g碳酸鈉，定容於100ml的水中

2.6 2n硫酸：

吸10ml的濃硫酸倒入170ml的水中

2.7 酶樣的製備

準確稱取1.000g固體酶或移取1ml液體酶樣，定容至100ml，於50℃水浴浸取1小時，過濾，濾液為供試酶液。則該酶已經稀釋100倍。

3. 程式

3.1 取1%果膠酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸餾水（ph3.5），在50℃水浴中保溫反應1小時。

3.2 取出後加熱煮沸2~3min，冷卻後，補水至20ml。

3.3 取5ml反應液於100ml碘量瓶中，加1m碳酸鈉溶液1ml，0.1n碘液5ml，搖勻，具塞，於室溫暗處下放置20min。

3.4 取出後加2n硫酸2ml，立即用0.05n硫代硫酸鈉溶液滴定至淺黃色，加1ml0.5%可溶性澱粉溶液，繼續滴定至藍色消失為止。

3.5 空白試驗以煮沸失活的酶液或蒸餾水代替酶液進行滴定。

3.6 每個酶樣最少做兩個平行樣。

4. 計算

4.1 將測得的各平行樣求od值的均值。

4.2 計算酶的活性單位依據以下公式

酶的活力= [(b-a)*n*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*w*60 ]

單位： u/g(ml)

式中： a：樣品滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數。

b：空白滴定所消耗硫代硫酸鈉的毫升數。

n：硫代硫酸鈉摩爾濃度。

0.5：1當量硫代硫酸鈉相當於0.5當量半乳糖醛酸。

20：反應液總體積

51：酶液體積以1ml計

52：吸取反應液

n：稀釋倍數

w：酶粉重量g或酶液體積ml

果膠酶怎麼樣定性檢測？什麼方法能像剛果紅染色檢測纖維素酶一樣可以出現透明圈？

4樓：匿名使用者