1樓：一笑煙然
實驗 48 過氧化物酶活性的測定（比色法） 過氧化物酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶,它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關係,在植物生長髮育過程中,它的活性不斷髮生變化,因此測量這種酶,
辣根過氧化物酶的活性測定方法
2樓：匿名使用者
測酶活性的實驗：
.用萃取化學公司法（amano法的改進型）測定葡萄糖氧化酶
（1）試劑
① 磷酸鹽緩衝液（ph7.0）：取6.
805g磷酸二氫鉀(kh2po4; merck, art.4873)溶於350ml蒸餾水中。用1m氫氧化鈉溶液(naoh (4g溶於100ml水))將ph值調至7.
0，用蒸餾水定容至500ml。
② 鄰-聯二茴香胺(o-dianisidine)溶液：取1.7mg鄰-聯二茴香胺（c14h16n2o2; serva, nr,19175）溶於25ml磷酸鹽緩衝液。
③ 過氧化物酶（辣根過氧化酶，181u/mg）溶液（約0℃）：取1.7mg過氧化物酶（serva, nr,31943）溶於5ml蒸餾水。
每毫升此溶液中應含有60個紅紫倍精單位。
④ 底物溶液（約0.55m）：取5.0gβ－d－葡萄糖（c6h12o6; sigma, no.g-5250）溶於蒸餾水中，定容至50ml。
使用前，至少得將此酶靜置3h。
⑤ 酶（待測的葡萄糖氧化酶）溶液：用磷酸鹽緩衝液溶解該酶。1ml配製的酶溶液中應含有大約0.1u。
0.0037g溶於500μl pbs, 再取10μl前者溶液定容至100pbs（約0.1u/ml）。
測酶活性（118u/mg）的實驗2
（1）操作步驟：將0.50mlβ－d－葡萄糖溶液、0.
10ml在冰水中冷卻過的過氧化物酶（辣根過氧化酶）溶液和2.4ml鄰-聯二茴香胺溶液滴入一隻小燒杯內混合，調溫至25℃，然後將其全部加到1cm的比色皿內，最後加0.1ml酶於待測的葡萄糖氧化酶溶液，同時按動秒錶。
在連續15min內每隔1min於436nm處測一次吸光度
(2)計算：用以下公式計算活性：
式中：e436――每分鐘吸光度的變化（436nm處）(15次的平均值)
ew――0.1ml所用酶液中含酶的重量（0.000074mg）
8.3――1μmol鄰-聯二茴香胺/ml的吸光度（436nm處）
3.1――反應混合物的總體積
u1=53.25u/ mg; u2=93.21u/ mg; u3=13.30u/ mg
測酶活性（118u/mg）的實驗5(061218)
（1）操作步驟：將333μlβ－d－葡萄糖溶液、67μl在冰水中冷卻過的過氧化物酶（辣根過氧化酶）溶液和1.6ml鄰-聯二茴香胺溶液滴入一隻1cm的比色皿內，調溫至25℃，最後加67μl酶於待測的葡萄糖氧化酶溶液，攪拌均勻(攪拌同時計時，共用8s，)，然後重新按動秒錶。
在連續15min內每隔1min於436nm處測一次吸光度
(2)計算：用以下公式計算活性：
式中：e436――每分鐘吸光度的變化（436nm處）(15次的平均值)
ew――67μl所用酶液中含酶的重量（0.00004958mg）
8.3――1μmol鄰-聯二茴香胺/ml的吸光度（436nm處）
2.067――反應混合物的總體積
god:
15min的平均值：
u1=181.23u/mg; u2=167.36u/ mg; u3=156.11u/ mg
4min的平均值：
u1=156.56u/ mg; u2=129.89u/ mg, u3=134.97u/ mg
3樓：蒲公英花開丶
過氧化物酶（辣根過氧化酶，181u/mg）溶液（約0℃）：取1.7mg過氧化物酶（serva, nr,31943）溶於5ml蒸餾水。
辣根，別名：馬蘿蔔，拉丁學名：armoracia rusticana.
屬罌粟目，十字花科、辣根屬多年生直立草本。全體**。根肉質肥大，紡錘形，白色，下部分枝。
莖粗壯，表面有縱溝，多分枝。原產歐洲東部和土耳其，已有2000多年的栽培歷史。中國的青島、上海郊區栽培較早，其他城郊或蔬菜加工基地有少量栽培。
根有特殊辣味，含烯丙（基）硫氰酸（c3h5**s），磨碎後幹藏，備作煮牛肉及奶油食品的調料，或切片入罐頭中調味。中國自古藥用，有利尿、興奮神經之功效。還具有較強的抗癌效果。
常用來測定蛋白質含量的方法有哪些，優缺點是什麼
4樓：其實不然
①凱氏定氮法
原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強鹼性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最後用標準酸滴定硼酸，通過標準酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理：尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲，在鹼性溶液中雙縮脲可與cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵，故多肽、蛋白質等都有雙縮脲（biuret）反應，產生藍色或紫色複合物。
比色定蛋白質含量。
缺點：靈敏度低，樣品必須可溶，在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg)，且會受樣品中 硫酸銨 及 tris 的干擾，但 準確度 較高，不受蛋白質的種類影響。
③folin酚法(lowry)
folin酚法是biuret 法的延伸，所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑（鹼性銅試劑），試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下，蛋白質中的巰基和酚基等可將cu2+還原成cu+， cu+能定量地與folin－酚試劑反應生成藍色物質，600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg)，但較麻煩，也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合，要特別注意均勻澈底，否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法：利用tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法：若樣品液中有少量核酸共存按下式計算：
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24e280-0.74e260 （280 260為角標）
⑤色素結合法（bradford 法）
直接測定法：利用蛋白質與色素分子（coomassie brilliant blue g-250）結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭（cbg）染色法測定蛋白質含量。cbg 有點像指示劑，會在不同的酸鹼度下變色；在酸性下是茶色，在中性下為藍色。當 cbg接到蛋白質上去的時候，因為蛋白質會提供 cbg一個較為中性的環境，因此會變成藍色。
當樣本中的蛋白質越多，吸到蛋白質上的cbg也多，藍色也會增強。因此，藍色的呈色強度，是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法：蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素，以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥bca法
bca（bicinchoninc acid procedure，4,4』-二羧-2,2』-二喹啉）法與lowry法相似，主要差別在鹼性溶液中，蛋白質使cu2+轉變cu+後，進一步以bca 取代folin試劑與cu+結合產生深紫色，在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中bca 比folin試劑穩定，因此bca與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度，較不受干擾，但會受還原糖 及edta的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠，呈洋紅色，具有高電子密度，並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色，顏色的改變與蛋白質有定量關係，可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團，如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團，可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘)，則可追蹤該金屬。
甲狀腺過氧化物酶抗體高怎麼辦，，甲狀腺過氧化物酶抗體高怎麼辦，
過氧化物酶 ec編號 1.11.1.x 是很大的一族酶，這一類酶當中有很多酶的最理想底物為過氧化氫，還有一些則有機的氫過氧化物如過氧化脂類。過氧化物酶有時會在其活化位置上包含一個血紅素輔因子。形態特徵過氧化物酶體 peroxisome 又稱微體 microbody 過氧化物酶體在1954年被發現時,...
為什麼過氧化物酶體不屬於內膜系統
過氧化物酶體 peroxisome 又稱微體 microbody 過氧化物酶體在1954年被發現時,由於不知道這種顆粒的功能，將它稱為微體 microbody 過氧化物酶體是由一層單位膜包裹的囊泡,直徑約為0.5 1.0 m,通常比 線粒體小。與溶酶體不同,過氧化物酶體不是來自內質網和高爾基體,因此...
過氧化鈉是怎麼形成的，過氧化鈉是什麼？
過氧化鈉中含有離子鍵 電子的得失 含有共價鍵 共用電子對 na2o2是由na 與過氧根離子 o22 按2 1構成，過氧根離子中存在 過氧鍵 o o 氧元素的化合價為 1價，介於氧的兩種穩定價態0與 2之間，因此可以發生如下反應 o o 的兩個氧原子均獲得電子而形成 2價穩定結構，表現強氧化性 如與s...