1樓：網友
螢光光譜分析法除了可以用作組分的定性檢測和定量測定的手段之外，還被廣泛地作為一種表徵技術應用於表徵所研究體系的物瞎咐高理、化學性質及其變化情況。例如，在生命科學領域的研究中，人們經常可以利用螢光檢測的手段，通過檢測某種螢光特定引數（如螢光的波長、強度、偏振和壽命）的變化情況來表徵生物大分子在性質和構象上的變化。很多化合物由於本身具有大的共軛體系和剛性的平面結構，因而具有能發射螢光的內在本質，我們稱這些化合物為螢光化合物。
在某些所要研究的體系中，由於體系自身含有這種螢光團而具有內源螢光，人們就可以利用其內源螢光，通過檢測某種螢光特性引數的變化，對該體系的某些性質加以研究。但是，如果所要研究的體系本身不含有螢光團而不具有內源螢光，或者其內源性質很弱，這時候就必須在體系中外加一種螢光化合物即所謂螢光探針，再通過測量螢光探針的螢光特性的變化來對該體系加以研究。例如，如果我們要檢測體系的極性，便可以將對極性敏感的螢光探針加入到體系中，然後通過對螢光探針的螢光特性的檢測，求得體系的極性，或通過探針的螢光特性的變化來表徵體系的極性的變化情況。
螢光分析法之所以發展如此迅速，應用日益廣泛，其原因之一是螢光分析法具有很高的靈敏度。在微量分析的各種方簡謹法中，應用較為廣泛的有比色法和分光光度法。但在方法的靈敏度方面，螢光分析法的靈敏度一般要比這兩種方法高2～3各數量級。
隨著現代電子技術的迅速發展，對於微弱光訊號檢測的靈敏度已大大提高，螢光分析的靈敏度常可達億分之幾，在與毛細管電泳分離技術結合、採用雷射誘導螢光檢測法時，已能接近或達到單分子檢測的水平[1]螢光分析法的另乙個優點是選擇性高。這主要是對有機化合物的分析而言。吸光物質由於內在本質磨尺的差別，不一定都會發螢光，況且，發螢光的物質彼此之間在激發波長和發射波長方面可能有所差異，因而通過選擇適當的激發波長和螢光測定波長，便可能達到選擇性測定的目的。
另外，由於螢光的特性引數較多，除量子產率、激發與發射波長之外，還有螢光壽命、螢光偏振等。因此，還可以通過採用同步掃瞄、導數光譜、三維光譜、時間分辨和相分辨等一些螢光測定新技術進一步提高測定的選擇性。除靈敏度高和選擇性好之外，動態線性範圍寬，方法簡便，重現性好，取樣量少，儀器裝置不復雜等等，也是螢光分析法的優點。
光譜定量分析為什麼用內標法,簡述其原理
2樓：拾柒
光譜定量分析用內標法的原理如下：
只有在實驗條件固定時，lgi與lgc成線性關係，因為a與光源、蒸發、激發等工作條件和試樣組成有關，實驗中，有些條件很難控制，直接用上面的定量方法誤差很大，為了提高分析結果的準確度，常採用內標法。
基本原理：在被尺廳測元素的譜線中，選一條線作分析線，在待測試樣中定量加入某一元素（或用基體元素），該元素稱內標元素，選內標穗陸元素的一條譜線作為內標線（或比較線）這兩條譜線組成分析線對，分析線與內標線的絕對強度的比值稱相對強陵族隱度。
內標法就是借測量分析線對的相對強度來進行定量分析的。內標法可分為計演算法、內標標準曲線法。按規定精密稱（量）取對照品和內標物，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液。
取一定量進樣，記錄色譜圖。
用含對照品和內標物的對照溶液所得色譜峰響應值，計算出校正因子f，再根據此校正因子f和在待測樣品中加入的內標物的量，及待測樣品各色譜峰響應值，即可計算出待測樣品中指定色譜峰對應的物質的量。
內標法的優點：
對進樣量不嚴格要求，測定的結果也較為準確，由於通過測量內標物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的，因而在一定程度上消除了進樣量、儀器不穩定等變化所引起的誤差，只對欲分析的組分峰做校正。
是結合了峰面積歸一法和外標法的優點的一種方法，它在加入內標物後，按峰面積歸一法的分析方法進行分析，這就避免了由於進樣的一致性及樣品歧視效應導致的偶然誤差。它的分析精密度也是比較高的，是一種比較理想的定量分析方法。
螢光分析法中還可以根據哪些引數進行定量
3樓：星修阿
x射線螢光光譜法進行定量分析的依據是元素的螢光x射線強度i1與試樣中該元素的含量wi成正比：
ii=iswi （
式中，is為wi=100%時，該元素的螢光x射線的強度。根據式(，可以採用標準曲線法，增量法，內標法等進行定量分析。但是這些方法都要使標準樣品的組成與試樣的組成儘可能相同或相似，否則試樣的基體效應或共存元素的影響，會給測定結果造成很大的偏差。
所謂基體效應是指樣品的基本化學組成和物理化學狀態的變化對x射線螢光強度所造成的影響。化學組成的變化，會影響樣品對一次x射線和x射線螢光的吸收，也會改變螢光增強效應。例如，在測定不鏽鋼中fe和ni等元素時，由於一次x射線的激發會產生nikα螢光x射線，nikα在樣品中可能被fe吸收，使fe激發產生fekα，測定ni時，因為fe的吸收效應使結果偏低，測定fe時，由於螢光增強效應使結果偏高。
但是，配置相同的基體又幾乎是不可能的。為克服這個問題，目前x射螢光光譜定量方法一般採用基本引數法。該辦法是在考慮各元素之間的吸收和增強效應的基礎上，用標樣或純物質計算出元素螢光x射線理論強度，並測其螢光x射線的強度。
將實測強度與理論強度比較，求出該元素的靈敏度係數，測未知樣品時，先測定試樣的螢光x射線強度，根據實測強度和靈敏度係數設定初始濃度值，再由該濃度值計算理論強度。將測定強度與理論強度比較，使兩者達到某一預定精度，否則要再次修正，該法要測定和計算試樣中所有的元素，並且要考慮這些元素間相互干擾效應，計算十分複雜。因此，必須依靠計算機進行計算。
該方法可以認為是無標樣定量分析。當欲測樣品含量大於1%時，其相對標準偏差可小於1%。
何謂內標法，光譜定量分析時為何要採用內標法
4樓：上海熙隆光電
內標法：是一種間接或相對的校準方法。在分析測定樣品中某組分含量時，加入一種內標物質以校誰和消除出於操作條件的波動而對分析結果產生的影響，以提高分析結果的準確度。
內標法在氣相色譜定量分析中是一種重要的技術。使用內標法時，在樣品中加入一定量的標準物質，它可被色譜拄所分離，又不受試樣中其它組分峰的干擾，只要測定內標物和待測組分的峰面積與相對響應值，即可求出待測組分在樣品中的百分含量。
內標法就是用在樣品中定量加入你要分析的物質，通過測得的實際樣品量和加入樣品量的比值來定量所要分析的樣品含量。內標法主要優點是簡單，快速。缺點是沒有標準曲線法定量精確。
何謂內標法,光譜定量分析時為何要採用內標法?
5樓：雨落千音
什麼是內標法。
內標法是將一定重量的純物質作為內標物加到一定量的被分析的樣品混合物中，然後，對含有內標物的樣品進行色譜分析，分別測定內標物和待測組分的峰面積或是峰高及相對的校正因子，按照公式和方法就可以求出被測組分在樣品中的百分含量。
為什麼要採用內標法。
內標法可以克服樣品中一些基質的干擾，使測定更準確，因為譜線的強度不僅與元素的濃度有關，還會受到許多因素的影響，採用內標法，可以消除因實驗條件的波動等因素帶來的影響，提高實驗的準確度。
6樓：匿名使用者
內標法是將一定重量的純物質作為內標物（參見內標物條）加到一定量的被分析樣品混合物中，然後對含有內標物的樣品進行色譜分析，分別測定內標物和待測組分的峰面積（或峰高）及相對校正因子，按公式和方法即可求出被測組分在樣品中的百分含量。
內標法可以克服樣品中一些基質的干擾，使測定更準確。
螢光分析法的特點
7樓：離開以後
螢光分析是一種先進的分析方法，它比電子探針法、質譜法、光譜法、極譜法等都應用的較廣泛和普及，這同螢光分析具有很多優點分不開的。螢光分析所用的裝置較簡單，如目測螢光儀和螢光光度計構造非常簡單完全可以自己製造。比起質譜儀、極譜儀和電子探針儀來它在造價上要便宜很多倍，而且螢光分析的最大特點是：
分析靈敏度高、選擇性強和使用簡便。同時具備這三大特點的儀器並不多 。 在紫外線照射下能直接發射螢光的化學元素並不很多，所以對一些元素進行螢光分析時大部分採用間接測定法，這就是用有機試劑與被測定的元素組成絡合物。
這些絡合物在紫外線照射下能發射出不同波長的螢光素，然後由螢光強度測定出該元素的含量。由於有機螢光試劑的品種繁多，用螢光分析可測定的元素有六十多種 。
例如對鉛的螢光分析：鉛離子pb與cl離子組成鉛氯絡合物，該絡合物在短波紫外光270毫微公尺激發下，它會發射出藍色螢光，螢光峰值波長在480毫微公尺，根據螢光強度在標準工作曲線上測定出pb的含量。該法能測定微克鉛/毫公升。
螢光分析法與吸光光度法有何區別
8樓：匿名使用者
恰好這也是我的儀器分析作業，剛剛寫好了。
1.原理方面：
相同點：吸光光度法和螢光分析法都是分子光譜。
不同點：吸光光度法是由分子對輻射能選擇性吸收由基態或較低能級躍遷到較高能級產生的分子光譜，是分子吸收光譜；而螢光分析法是由分子對輻射能選擇性吸收由基態躍遷到單重激發態，當由其第一激發單重態的最低振動能級回到基態各振動能級間的躍遷所產生的分子光譜，是分子發射光譜。
2.儀器方面：
相同點：它們都有光源、單色器、液槽、檢測器和訊號顯示器五部分組成。
不同點：螢光光度計採用垂直的計量方式，在與激發光垂直的方向測量螢光以消除透射光的影響。螢光光度計有兩個單色器，乙個是激發單色器，置於液槽前，用於獲得單色性較好的激發光；另乙個是發射單色器，置於液槽和檢測器之間，用於分出某一波長的螢光，消除其它雜散光干擾。
螢光光度法可以增大發光強度來提高靈敏度，但是習慣光度法測的是吸光度，測定靈敏度不會提高。
紫外分光光度法和螢光分析法的區別和各自的優缺點?
9樓：乾萊資訊諮詢
1、原理不同：
1）紫外分光光度計，就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。
2）螢光分光光度法是根據物質的螢光譜線位置及其強度進行物質鑑定和含量測定。可根據不同的物質其組成與結構調整所吸收的紫外-可見光波長和發射光的波長。
2、應用範圍不同：
1）紫外分光光度計主要用於實驗室。例如：鑑定物質：
根據吸收光譜圖上的一些特徵吸收，特別是最大吸收波長λmax和摩爾吸收係數ε是檢定物質的常用物理引數。這在藥物分析上就有著很廣泛的應用。與標準物態穗隱及標準圖譜對照等。
2）螢光分光光度法的靈敏度通常比分光光度法高2〜3個數量級。在衛生檢驗、環境及食品分析、藥物分析、生化和臨床檢測等方面有著廣泛的應用。
3、所用燈不同： 帆廳。
1）紫外光區通常用氫燈或氘燈。
2）螢光分光光度法通常用鎢燈或滷鎢燈。
4、優缺點：
1）紫外分光光度計高自動化程度，維護方便、操作簡便、效率高。
2）螢光分光光度法具有檢測靈敏度高、專屬性較強和使用簡便等特點，常用於微量甚至痕量毒物的定量分析。
簡述熒光光譜產生的過程，簡述熒光光譜產生的過程
分子吸收光子後會躍遷到高的 電子激發態。處於高電子激發態的分子不穩定，回會弛豫回到基態答，在這個過程中有以下幾種可能 1 經過輻射躍遷返回基態，這個過程放出光子，即熒光 2 無輻射躍遷回到基態，這個過程沒有熒光 3 無輻射躍遷來到三重態，這個過程稱為系間竄越。下面說說熒光光譜 熒光光譜的測量是將樣品...
溶液的熒光光譜具有什麼特徵
材料發光原理 光照射在某些物質上時，基態分子吸收光後躍遷為激發態，激發態分子在因轉動，振動等損失一部分激發能量後，以無輻射躍遷下降到低振動能級，再從低振動能級下降到基態，過程中激發態分子將以光的形式釋放出能量，該光稱為熒光。影響輻射躍遷過程的不僅是該過程的初態和末態的能級位置和性質，在激發過程中涉及...
免疫熒光二抗的選擇求教,請教免疫熒光雙標中熒光二抗的選擇是否合適
要是你要用的抗體不就行了，國產跟國外的差別也不是那麼大好不好？建議樓主先做試驗試試，個人覺得影響不會很大。只要fitc標記的羊抗鼠抗體是合格產品即可。經費有限的話，只要得到試驗結果不就行了。請教免疫熒光雙標中熒光二抗的選擇是否合適 一般來說,選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮 1.二抗應選用與使用...