1樓:匿名使用者
其實標籤就是圖方便,比如你家實驗室要拉100個蛋白來研究,不可能買100個抗體吧?有標籤就一支抗體解決了。
另外你說的也對,自身抗體不是個個都好用的。
用標籤抗體做染色質免疫共沉澱要注意什麼問題
2樓:義翹神州加油
陰性、陽性對照設定;
抗體特異性分析其他…
如何看免疫共沉澱圖
3樓:匿名使用者
分清input和ip,再者就看用什麼抗體ip。input樣品中有a和b蛋白,如果用a蛋白的抗體ip,a蛋白可以富集,在ip的樣品中若同樣可以檢測到b蛋白的存在,說明a和b蛋白互作。
免疫共沉澱兩個抗體需要不同種源嗎
4樓:神級人氏
不需要。或者說需要分開一個個證明。用一個抗體去做ip,然後分別用3個抗體做ib,看你抓下的蛋白是否是3個蛋白複合物。
抗體(antibody)指機體的免疫系統在抗原刺激下,由b淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白。主要分佈在血清中,也分佈於組織液及外分泌液中。 抗體通常由一些基礎單元組成,每一個抗體包括:
兩個長(大)的重鏈,以及兩個短(小)的輕鏈。而輕鏈和重鏈之間以雙硫鍵連線。輕鏈和重鏈又分為可變區和恆定區,而不同型別的重鏈恆定區,將會導致抗體種型的不同。
免疫共沉澱的缺點
5樓:北京索萊寶科技****
(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用;
(2)兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋樑作用;
(3)必須在實驗前**目的蛋白是什麼,以選擇最後檢測的抗體,所以,若**不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。
(4)靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱:
免疫共沉澱(co-immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
免疫共沉澱的注意事項
(1) 確保共沉澱的蛋白是由所加入的抗體沉澱得到的,而並非外源非特異蛋白,單克隆抗體的使用有助於避免汙染的發生;
(2) 要確保抗體的特異性,即在不表達抗原的細胞溶解物中新增抗體後不會引起共沉澱;
(3) 確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中,而不是由於細胞的溶解才發生的,這需要進行蛋白質的定位來確定。
6樓:▆▆▆丈
(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用;
(2)兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋樑作用;
(3)必須在實驗前**目的蛋白是什麼,以選擇最後檢測的抗體,所以,若**不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。
(4)靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱陰性對照的意義是什麼?
7樓:浙大阿米巴
因為要排出汙染的可能性。
比如你檢測一個兔子細胞的某種蛋白質,你沒有設定igg的對照,而操作中有非特異性蛋白質,又和你設計的抗體作用,那麼就出現了陽性結果。如果做了陰性對照,也就是igg對照,對照沒有出現陽性就說明沒有非特異性的蛋白,對照出現陽性,說明你的抗體有非特異結合的可能,需要重新開始實驗。
8樓:匿名使用者
怕你的目標蛋白能與抗體相互作用,比如說你要沉澱的蛋白跟金黃色葡萄球菌的a蛋白或補體很類似,你就無語了!
免疫共沉澱和免疫沉澱有區別嘛?
9樓:匿名使用者
如果說區別的話,免疫沉澱是單一的特異性抗
體結合其對應抗原,使之聚集沉澱。免疫共沉澱是a抗體結合a抗原,b抗體結合b抗原,如果a抗原能與b抗原相互作用而結合的話,最終aabb都連在一起沉澱,檢測方法可以使用ab在一起激發熒光,分開無熒光,所以當檢測到熒光則說明ab有相互作用,無則沒相互作用,也可使a固定在固相載體,檢測b,若檢測到b則ab有相互作用,若沒檢測到則無相互作用。基本來說免疫沉澱是看有沒有抗原抗體結合,免疫共沉澱則是看兩個抗原有無相互作用
免疫共沉澱抗體的選擇,免疫共沉澱的缺點
可以用兔抗人的其他抗體做對照,已知不與你的目的蛋白有結合的 希望能解決您的問題。免疫共沉澱的缺點 1 可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質 蛋白質相互作用 2 兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋樑作用 3 必須在實驗前 目的蛋白是什麼,以選擇最後檢測的抗體,所以,若 不正確,實...
染色體免疫共沉澱中用的蛋白A G瓊脂糖可以自己做嗎?該如何制
可以買一個啊,上海生工就有賣的,產品編號 bs694 免疫共沉澱中proteina g的工作原理?western blot中封閉原理 不知道你所說的proteina protein g 是偶聯了beads的嗎?如果是 用來結合抗體的。如果不是 一般用來在加入抗體之前的封閉,當然也可以用來結合抗體的。...
能夠做組織免疫熒光的抗體可以做細胞免疫熒光嗎
你好!你用的是單抗嗎?如果是單抗,他們會有說明書說上面是可適用的實驗範圍,那個是給他們驗證過的。如果沒有,你也可以自己嘗試用一下,說不定可以用。但是也有可能結果要麼是不理想,要麼是沒結果。這個要看運氣了。做實驗本身就有運氣成分在裡面的。能做免疫熒光的抗體可做免疫組化實驗嗎 免疫熒光也是組織切片,應該...