1樓：義翹神州加油
最好先做一步蛋白富集，而後做質譜。
否則樣品濃度太低了
為什麼講生物質譜是蛋白質組學研究的主要工具
2樓：楊風遊
蛋白質組學(proteomics)研究生物質譜技術
對分離的蛋白質 進行鑑定是蛋白質組研究的重要內容，蛋白質微量測序、氨基酸組成分析等傳統的蛋白質鑑定技術不能滿足高通量和高效率的要求，生物質譜技術是蛋白質組學(proteomics)的另一支撐技術。
生物質譜技術在離子化方法上主要有兩種軟電離技術，即基質輔助鐳射解吸電離(matrix―assisted laser desorption／ionization，maldl)和電噴霧電離(electrospray ionization，esl)。maldi是在鐳射脈衝的激發下，使樣品從基質晶體中揮發並離子化。esi使分析物從溶液相中電離，適合與液相分離手段(如液相色譜和毛細管電泳(capillary electrophoresis))聯用。
maldi適於分析簡單的肽混合物，而液相色譜與esi―ms的聯用(lc―ms)適合複雜樣品的分析。
軟電離技術的出現拓展了質譜的應用空間，而質量分析器的改善也推動了質譜儀技術的發展。生物質譜的質量分析器主要有4種：離子阱(iontrap，it)、飛行時間(tof)、四極杆(quadrupole)和傅立葉變換離子迴旋共振(fourier transform ion cyclotron resonance，fticr)。
它們的結構和效能各不相同，每一種都有自己的長處與不足。它們可以單獨使用，也可以互相組合形成功能更強大的儀器。
離子阱質譜靈敏度較高，效能穩定，具備多級質譜能力，因此被廣泛應用於蛋白質組學(proteomics)研究，不足之處是質量精度較低。與離子阱相似，傅立葉變換離子迴旋共振(fticr)質譜也是一種可以「捕獲」離子的儀器，但是其腔體內部為高真空和高磁場環境，具有高靈敏度、寬動態範圍、高解析度和質量精度(質量準確度可很容易地小於1mg／l)，這使得它可以在一次分析中對數百個完整蛋白質分子進行質量測定和定量。fticr―ms的一個重要功能是多元串級質譜，與通常的只能選一個母離子的串級質譜方式不同，fticr―ms可以同時選擇幾個母離子進行解離，這無疑可以大大增加蛋白質鑑定工作的通量。
但是它的缺點也很明顯，操作複雜、肽段斷裂效率低、**昂貴等，這些缺點限制了它在蛋白質組學(proteomics)中的廣泛應用。maldi通常與tof質量分析器聯用分析肽段的精確質量，而esi常與離子阱或**四極杆質譜聯用，通過碰撞誘導解離(collision―induceddissociation，cid)獲取肽段的碎片資訊。
蛋白質組學樣品前處理的方法
3樓：匿名使用者
要回答這個問題，首先需要理解樣品前處理需要達到的目的：減少人為降解和修飾，並且儘量多的釋放肽段。
整個過程可以分為以下流程：先從組織、體液或細胞中提取蛋白質，拿到蛋白混合溶液（根據你的研究目的，可以對蛋白先做分離，或者不分離），接下來還原烷基化（還原的過程是將蛋白的二硫鍵開啟，然後烷基化可以修飾巰基，防止遊離的巰基再生成二硫鍵）處理，並酶解成肽段。
1，樣品的收集與儲存
組織樣品
1) 對於人體手術切除的組織，有條件的話，最好用pbs（磷酸緩衝鹽溶液，作為溶劑，起溶解保護試劑的作用）取完之後直接去血。如果沒有去血，可以-80℃液氮儲存，乾冰運輸。
2）對於小鼠、大鼠、兔子之類的組織樣品，建議用灌流的方式來去血，尤其是像肝臟、胃、心臟這類大的組織，可以直接用灌流的方式去血，去得最乾淨。其次的方案是在後期剪碎的時候去血。
細胞樣品
常規實驗，建議收到5*1e6~1e7個細胞以上的樣品量（有些實驗需要的樣品量會少一些，後面會詳細講）。細胞取好後，首先用pbs清洗一下細胞表面，因為大部分培養基裡面都含有血清，這部分血清得洗乾淨了先~
如果是做分泌蛋白研究的話，首先用pbs清洗樣品幾次，再用條件培養基（不含有血清的培養基）進行培養，根據細胞情況，大概12個小時以後，離心，去掉細胞碎片，取上清，就能提取到分泌蛋白了。
血清樣品
1）血漿樣品：可以通過醫院常用的edta抗凝管進行收集，收集到的血漿會呈懸浮狀態，離心去掉血細胞。
2）血清樣品：現在大部分研究都直接針對血清樣品，它的成份更簡單，沒有凝集素，沒有大量的血細胞，針對性會更強。收集血清樣品時，直接把血清吸到管子裡，室溫靜置讓它凝結，上清黃色部分就是血清樣品啦。
2，研磨或超聲破碎樣品，為了減少人為操作引入的修飾，通常會準備大量的冰，進行冰上的操作。同時還需要加入蛋白酶抑制劑，防止在操作過程中蛋白被樣品中自帶的蛋白酶降解掉。
3，充分熔接蛋白質，如果蛋白沒有充分溶解，能提取到的蛋白就會很少，達不到研究目的。
4，充分解旋蛋白質，通常，蛋白質都是成球狀的穩定狀態，解旋蛋白質就是將球狀蛋白中的二硫鍵開啟，讓它形成鏈狀結構，以便進行下一步酶切。
5，酶解蛋白質，一般會用多種酶對蛋白質進行酶解。
6，去除雜質，我們要知道，質譜是一個非常靈敏的儀器，它檢測的是多肽的質荷比。所有的鹽類，以及所有會進行離子化的雜質，都會干擾到肽段的檢測。所以我們會要求進入質譜之前的蛋白樣品非常乾淨。
在蛋白水平及肽段水平都會進行去除雜質的步驟。
更詳細的，下次再聊~
4樓：匿名使用者
溶劑提取法
同一溶劑中，不同物質具有不同的溶解度。利用混合物中各物質溶解度的不同將混合物組分完全或部分分離的過程稱為萃取，也稱提取。常用方法有以下幾種。
(一)浸提法
浸提法又稱浸泡法。用於從固體混合物或有機體中提取某種物質，所採用的提取劑，應既能大量溶解被提取的物質，又要不破壞被提取物質的性質。為了提高物質在溶劑中的溶解度，往往在浸提時加熱。
如用索氏抽提法提取脂肪。提取劑是此類方法中重要因素，可以用單一溶劑，也可以用混合溶劑。
(二)溶劑萃取法
溶劑萃取法用於從溶液中提取某一組分，利用該組分在兩種互不相溶的試劑中分配係數的不同，使其從一種溶液中轉移至另一種溶劑中，從而與其他組分分離，達到分離和富集的目的。通常可用分液漏斗多次提取達到目的。若被轉移的成分是有色化合物，可用有機相直接進行比色測定，即萃取比色法。
萃取比色法具有較高的靈敏度和選擇性。如雙硫腙法測定食品中的鉛含量。此法裝置簡單、操作迅速、分離效果好，但是成批試樣分析時工作量大。
同時，萃取溶劑常易揮發，易燒．且有毒性，操作時應加以注意。
鹽析法向溶液中加入某種無機鹽，使溶質在原溶劑中的溶解度大大降低，而從溶液中沉澱析出，這種方法叫做鹽析。如在蛋白質溶液中加入大量的鹽類(硫酸銨)，特別是加入重金屬鹽，使蛋白質從溶液中沉澱出來。
在進行鹽析工作時，應注意溶液中所加入的物質的選擇。它應是不會破壞溶液中所要析出的物質，否則達不到鹽析提取的目的。
化學分離法
(一)磺化法和皂化法
這是處理油脂或脂肪樣品時經常使用的方法。例如，殘留農藥分析和脂溶性維生素測定中，油脂被濃硫酸磺化，或被鹼皂化，由疏水性變成親水性，使油脂中需檢測的非極性物質能較容易地被非極性或弱極性溶劑提取出來。
(二)沉澱分離法
沉澱分離法是利用沉澱反應進行分離的方法。在試樣中加入適當的沉澱劑,使被測組分沉澱下來，或將干擾組分沉澱除去，從而達到分離的目的。
(三)掩蔽法
利用掩蔽劑與樣液中的干擾成分作用，使干擾成分轉變為不干擾測定的狀態，即被掩蔽起來。運用這種方法，可以不經過分離干擾成分的操作而消除其干擾作用，簡化分析步驟，因而在食品分析中應用十分廣泛，常用於金屬元素的測定。
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