1樓：匿名使用者
細胞凍存是細胞儲存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置於一196~c液氮中低溫儲存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性儲存起來，這樣在需要的時候再復甦細胞用於實驗。而且適度地儲存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被汙染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。
除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞碸(dmso)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。
採用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低於-25℃時可加速，到-80℃之後可直接投入液氮內(-196℃)。復甦細胞時則直接將裝有細胞的凍存管投入40℃熱水中迅速解凍。
材料：凍存管，離心管，細胞培養用材料，500 ml燒杯，膠布，搪瓷杯，75%酒精棉。
藥品：培養基(rpmi1640或dmem)，小牛血清，胰蛋白酶溶液，二甲基亞碸(dmso)或甘油，臺盼藍染液，液氮。
儀器：4℃冰箱，-70℃冰箱，液氮容器，微量加樣器，水浴鍋，離心機。
一)細胞凍存。
1.取待凍存的細胞用胰酶消化(見相關實驗細胞傳代培養部分)，用培養基將細胞沖洗下來。800 r/min離心5 min，棄上清收集細胞。
如果是懸浮生長的細胞，則可直接離心收集細胞。
2.加入適量凍存液(10%甘油+90%培養基，或者10%dmso+90%培養基)製成細胞懸液。細胞濃度宜大，3×106個/ml左右，並可適量增加牛血清濃度至20%。
3.細胞懸液裝入凍存管中。用膠布封裹，做好標記(寫上細胞種類、時間及凍存條件等)。
4.凍存管在4℃下存放30 min，轉放-20℃ h，再轉人-70℃ 4-12 h後即可轉移到液氮內(-196℃)，注意進行登記。
二)細胞復甦。
1.取一搪瓷杯盛上適量自來水加熱至40℃左右。
2.從液氮中取出凍存管立即投人40℃水中迅速解凍。
3.取出凍存管，用75%酒精清潔管口，開啟。
4.離心去上清收集細胞，用無血清培養基洗1次，加人3 ml新鮮培養基，於小培養瓶中培養。
5.每日觀察細胞生長情況，如果死細胞較多，復甦次日應換液。待細胞長滿後可進行傳代培養。
2樓：外遇
在冰箱的溫度下細胞的所有生物代謝活動幾乎完全停止，酶和各種蛋白質的活性為零，活細胞處於靜止的狀態，但並不破壞細胞膜的完整和蛋白質的結構。溫度快速回升後，細胞能夠繼續存活。
一般培養細胞在-80攝氏度（低溫冰箱）或-196攝氏度（液氮）中儲存，-80只能短期儲存，液氮中一般能夠儲存一年以上。在這樣的溫度下細胞的所有生物代謝活動幾乎完全停止，酶和各種蛋白質的活性為零，活細胞處於靜止的狀態，但並不破壞細胞膜的完整和蛋白質的結構。溫度快速回升後，細胞能夠繼續存活。
動物細胞培養基中新增飼養細胞的的作用?
3樓：相信未來
新增飼養細胞的作用是促進細胞的發育。
動物細胞培養（animal cell culture）就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然後，放在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和增殖。
細胞培養是指細胞在體外條件下的生長，動物細胞在單獨細胞培養的過程中不再形成個體。
體外細胞培養所需營養物質與體內基本相同，例如，需要糖、氨基酸、無機鹽、促生長因子、微量元素等。將細胞所需的上述物質按其種類和所需數量嚴格配製而成的培養基，稱為合成培養基。
由於動物細胞生活的內環境還有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入動物血清以提供一個類似生物體內的環境，因此在使用合成培養基時，通常需加入血清、血漿等一些天然成分。
動物細胞培養中細胞如何凍存？
4樓：損害
細胞凍存的原則是：凍存緩慢降溫，復甦快速升溫。不同的動物細胞稍微有點不同，下面是一般的方法：
一）細胞凍存。
1. 配製含10%dmso或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中、；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～ ml；
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
7. 凍存：標準的凍存程式為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/
min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
二） 細胞復甦。
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，並不時搖動令其儘快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，開啟蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管並滴加10倍以上培養液，混勻；
3. 離心， 1000rpm，5min；
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養；
5. 次日更換一次培養液，繼續培養。
5樓：隨儂
簡單說一下步驟。
1.將70%~80%密度，生長良好的細胞用atv消化，離心，倒掉培養基。
2.用fbs清洗細胞兩次，離心。
3.加900微升fbs吹打懸浮細胞，並置於凍存管，向凍存管加入100微升dmso，迅速上下顛倒混勻。
4.將凍存管用醫用白膠布密封，置於凍存盒中，將凍存盒置於-80冰箱，24小時後取出置於液氮長期凍存。若沒有凍存盒，可對凍存管採用梯度凍存，從-20，-80，再到液氮的方法。
6樓：匿名使用者
傳代時如有少量富餘細胞，應立即作為種細胞儲備凍存，加以保管，不得用作常規實。
驗之用。利用凍存的種細胞儲備可製備和補充工作細胞儲備。如果種細胞儲備用盡，可利用凍存的工作細胞儲備製備新的種細胞儲備，這樣與最初凍存時相比，細胞代數。
增加較少。對培養的細胞進行凍存的最佳方法是將細胞置於含有二甲基亞碸 (dmso) 等冷凍保護劑。
的完全培養基中於液氮中儲存。冷凍保護劑可降低培養基的冰點，並可減緩冷卻速度，大大降低冰晶形成的危險 (冰晶可損傷細胞，導致細胞死亡)。
注：dmso 可促進有機分子進入組織。操作含 dmso 的試劑時，應採用與此類物質安全。
危害相適應的裝置和操作規範，並應按照當地法規處置此類試劑。
7樓：匿名使用者
不知道，用壓縮的氮氣吧？
動物細胞培養的一般步驟是什麼？
8樓：網友
一、復甦。
1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化後（大概分鐘），拿出來噴點酒精放到超淨工作臺裡。
2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中（用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鐘。
3.把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前後左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分佈。
4.標好細胞種類和日期、培養人名字等，放到co2培養箱中培養，細胞貼壁後換培養基。
天換一次培養基。
二、傳代。1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2.把原有培養基吸掉。
3.加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鐘。
4.細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化。
5.用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。
6.把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。
7.倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。
8.根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續培養。
三、 凍存。
把細胞消化下來並離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然後放到液氮灌中儲存。
凍存液的配製： 70%的完全培養基 20
動物細胞培養中的動物血清有什麼作用
動物細胞培養中的動物血清，其作用是 可以補充合成培養基中缺乏的物質。解析 動物細胞培養所需要營養物質，一些還沒弄清，所以需要要新增血清。血清中含有蛋白質 氨基酸 葡萄糖 激素等，其中蛋白質主要為白蛋白和球蛋白。氨基酸有多種，是細胞合成蛋白質的基本成分，其中有些氨基酸動物細胞本身不能合成 稱為必需氨基...
動物細胞培養的常用培養基型別有哪些？各有何特點和用途
動物細胞的培養基的種類和組成 分3類 天然培養基 合成培養基 無血清培養基 天然培養基 天然培養基主要取自動物體液或從動物組織分離提取。其優點是營養成分豐富，培養效果良好，缺點是成分複雜，受限。天然培養基 液的種類很多，包括生物性液體 如血清 組織浸液 如胚胎浸液 凝固劑 如血漿 等。如 胎牛血清 ...
動物細胞培養和植物組織培養的主要區別是
答案c培養基不同 植物細胞 固體培養基 動物細胞 液體培養基 培養基的成分不同 動物細胞培養必須利用動物血清，植物組織培養則不需要，產物不同 植物組織培養最後一般得到新的植物個體，而動物細胞培養因為動物體細胞一般不能表達其全能性，因此得到的是同一種的細胞。所以c選項正確。動物細胞培養與植物組織培養的...