1樓：聽風
目前已知有三種方法可以用來在體外連線dn**段：
第一種方法是，用dna連線酶連線具有互補粘性末端的dn**段；（人教版高中生物選修3中提到的e·colidna連線酶，**於大腸桿菌，可用於連線粘性末端；t4dna連線酶，**於t4噬菌體，可用於連線粘性末端和平末端，但連線效率低。）
第二種方法是，用t4dna連線酶直接將平末端的dn**段連線起來，或是用末端脫氧核苷酸轉移酶給具平末端的dn**段加上poly（da）-poly（dt）尾巴之後，再用dna連線酶將它們連線起來；
第三種方法是，先在dn**段末端加上化學合成的銜接物或接頭，使之形成粘性末端之後，再用dna連線酶將它們連線起來。這三種方法雖然互有差異，但共同的一點都是利用dna連線酶所具有的連線和封閉單鏈dna的功能。
常用的目的基因載體有哪些
2樓：多才的英語達人
作為基因工程的載體應該具備標記基因、多個限制性內切酶切點、能夠在宿主細胞內複製和穩定存等特點．常見的載體種類有質粒、動植物病毒、噬菌體．細菌核區的dna不能作為運載目的基因的載體．
將目的基因構建在表達載體上的方法有哪些
3樓：匿名使用者
有兩種常用的方法。第一種是直接將pcr擴增的基因片段酶切，然後連線到酶切過的表達載體上。第二種是先把pcr產物連到過度載體上，再從過度載體搶切下目的基因，最後再連線到酶切過的表達載體上。
獲取目的基因的方法有哪些（詳細）
4樓：奔三不再二
獲取目的基因的方法主要有兩種：
一是從供體細胞的dna中直接分離基因,最常用的方法是「鳥槍法」又叫「散彈射擊法",另一種是人工合成基因,這種方法有兩條途徑,
二是以目的基因轉錄的信使rna為模板,反轉錄成互補的單鏈dna,再在酶的作用下合成雙鏈dna,即目的基因,另一條途徑是蛋白質的氨基酸序列,推測出信使rna序列,再推測出結構基因的核苷酸序列,然後用化學的方法以單核苷酸為原料合成.
5樓：匿名使用者
..剛好學到
基因工程流程的第一步就是獲得目的dn**段,如何獲得目的dn**段就成為基因工程的關鍵問題。所需目的基因的**,不外乎是分離自然存在的基因或人工合成基因。常用的方法有pcr法、化學合成法、cdna法及建立基因文庫的方法來篩選
直接獲取
1.從基因文庫中獲取 這個沒什麼就是現成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了（基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構建基因組文庫的一般操作程式如下：
① 選用特定限制性內切酶， dna進行部分酶解，得到dna限制性片段② 選用適當的限制性內切酶酶解λ噬菌體載體dna。③ 經適當處理，將基因組dna限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統將重組體包裝成完整的顆粒。
⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌，形成大量噬菌斑，從而形成含有整個dna的重組dna群體，即文庫。）經典解釋
2.cdna文庫法（即原教材中提到的逆轉錄法）。cdna文庫，是指彙集以某生物成熟mrna為模板逆轉錄而成的cdna序列的重組dna群體。
雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因，但是由於高等真核生物基因組dna文庫比其cdna文庫大得多，相關工作量同樣大得多。更為重要的是，在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內含子，但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在，所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉錄本中去除間隔序列，即不能表達真核生物dna。而在真核生物成熟mrna中已不存在間隔序列（已在拼接過程中被去除），所以可以以真核生物成熟mrna為模板，逆轉錄而成的cdna可被大腸桿菌表達。
因此，在基因工程中，cdna文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，又叫「散彈射擊法」。這種方法有如用獵槍發射的散彈打鳥，無論哪一顆彈粒擊中目標，都能把鳥打下來。
鳥槍法的具體做法是：用限制酶（即限制性內切酶）將供體細胞中的dna切成許多片段，將這些片段分別載入運載體，然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞，讓供體細胞所提供的dna（外源dna）的所有片段分別在受體細胞中大量複製（在遺傳學中叫做擴增），從中找出含有目的基因的細胞，再用一定的方法吧帶有目的基因的dn**段分離出來。如許多抗蟲，抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用「鳥槍法」獲取目的基因的優點是操作簡便，缺點是工作量大，具有一定的盲目性。
人工合成
1.(主要是序列已知的基因)。主要是通過dna自動合成儀，通過固相亞磷酸醯胺法合成，具體過程可以網上查詢，反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連線上去成為核苷酸序列，一般適於分子較小而不易獲得的基因。
對於大的基因一般是先用化學合成法合成引物，再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction ,pcr)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重複性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一dn**段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛髮、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的dna供分析研 究和檢測鑑定。
過去幾天幾星期才能做到的事情，用pcr幾小時便可完成。pcr技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑
他只是給目的基因的擴增
好累~....
6樓：abc高分高能
如何從基因文庫中獲取目的基因
7樓：糟油酒丸
請看擺渡百科「人工合成基因」條目。
直接獲取的。。。用引物pcr出來--請看擺渡百科「分子克隆」條目。
第二題中，什麼是目的基因與載體之間的反向連線，為什麼避免這個可以提高重組質粒的比例
目的基因具有從起始密碼子到終止密碼子的方向性，必須正向連線才能獲得正確克隆，構建的載體才能正確表達目的蛋白。基因表達載體和重組質粒的區別 基因表達載體的構建 即目的基因與運載體結合 是實施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。將目的基因與運載體結合的過程，實際上是不同 的dna重新組合的過程。如果以...
質粒為什麼是基因工程最常用的運載體
質粒具備作為載體的幾個條件 三個條件 1 能在宿主細胞內複製並穩定儲存 2.具有多個限制酶切位點 方便剪下3.具有標記基因,有利於檢測,受體為細菌或動植物時都可以用質粒做載體.這是它本身的特點決 定的 質粒是一個統稱，並不是一個固定的 質粒為什麼是基因工程最常用的運載體受體 a 質粒為小型環狀dna...
基因表達載體的構建方法是一致的,基因表達載體的構建方法有幾種
基因表達載體的構建 是將目的基因與運載體結合的過程 基因表達載體的構建方法有幾種 你好，具體的看看這個吧 希望有所幫助 現在很多生物公司可以提供載體構建服務的，例如中美泰和生物技術公司 如何構建一個基因的過表達載體 當拿到一個基因的dn 段後，就需要把它匯入一個載體，一方面長期儲存。另一方面也需要以...