1樓：匿名使用者
t克隆的原理是基於常規pcr反應中所使用taq聚合酶能夠在pcr產物的3『末端非特異性新增一個a,這樣實際上常規pcr產物都含有3端突出一個a的粘性末端.基於這個原理,常規的線性t－克隆載體（puc18和puc19等）在其3』末端新增一個t,這樣的載體能夠和任何pcr產物進行連線克隆,並不需要新增任何特異性的粘性末端位點.這個就是t克隆的原理了.
分析原因可能有： 1、t載體連線有問題，重新調整目的片段和t載體的比例，重新連線。 2、pcr某種試劑出問題了，以前有個師姐就是這樣，怎麼也擴不出來，讓別人帶樣擴出來了，原來是taq 酶出問題了，你也可以確定一下。
2樓：潛淑敏熊壬
關鍵是這個粘性末端帶的是什麼。因為t
載體的末端是突出的t。如果直接是pcr產物，需要考慮，用taq酶擴增的片段可以直接連，如果是高保真酶擴增的片段，需要用taq酶加a尾，大約30min左右。
如果是已經經過酶切的片段，確實要補平加a。如果是這樣，為什麼不直接去連目標載體呢？
最近遇到目的片段與t載體進行連線，目的片段近2000bp，是不是太長了，連線效率會降低，有沒有什麼好辦法？
3樓：匿名使用者
你確定p出來了？ 這個和長度沒有多大關係的 做了幾次呢
包含的含能組什麼詞
含能組什麼詞 包含 含淚 蘊含 內 含糊 含蓄 容 含情 含意 含蘊 含怒 含冤 含恨 含義 含羞 含混 隱含 暗含 含悲 飽含 含量 含苞 含頳 含苴 含斂 含孝 含文 含華 含吐 含怨 含膏 含和 含歌 含胡 含臉 含蘗 含煙 含飯 含靁 斂含 含汙 含忽 忍淚含悲 含糊不清 含辛如苦 羹藜含糗...
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