影響淋巴細胞轉化試驗細胞轉化率的因素有哪些

2021-03-19 18:19:18 字數 1676 閱讀 8605

1樓:匿名使用者

⑴、受體細胞轉化的受體細胞一般是限制-修飾系統缺陷的突變株,即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變株,它可容忍外源dna分子進入體內並穩定地遺傳給後代。另外還應根據載體的性質及實驗的目的選擇合適的宿主。此外,受體細胞生長狀態和密度也很重要。

不要使用經過多次轉接或儲存於4℃的培養菌。細胞生長密度以剛進入對數生長期時為好,密度過高或不足均會影響轉化率。⑵、載體dna和重組dna方面載體本身性質決定了轉化的高低,不同的載體dna轉化同一受體細胞,其轉化效率不同。

載體的空間構象也有明顯影響,超螺旋結構的載體質粒往往有較高的轉化率,經體外酶切連線操作後的載體dna或重組dna由於空間上難以恢復,其轉化率常比cccdna低兩個數量級。對以質粒為載體的重組分子而言,分子量大的轉化效率低。⑶、操作方面感受態細胞的製備對轉化率影響較大。

一般未經特殊處理的培養細胞對重組dna分子不敏感,難以轉化成功。為防止雜菌和雜dna的汙染,整個操作均應在無菌條件下進行,所有器皿最好是新的,並經高壓滅菌處理,所有試劑也都要滅菌處理。⑷、轉化體系中重組dna的濃度與純度轉化體系中重組dna的濃度與純度對轉化率也有一定影響。

在一定濃度範圍內,濃度越高,轉化率越高,重組dna純度越高,轉化率越高。⑸、外源基因與宿主染色體的同源性外源基因**與宿主親緣關係越近,越易整合到宿主染色體中,轉化率越高,否則易被宿主核酸酶降解而降低轉化率。

影響感受態細胞轉化效率的因素有哪些

2樓:匿名使用者

1.感受態細胞的質量,比如超級感受態比普通感受態轉化效率高很多;2.質粒濃度及質量,連線產物因為質粒濃度低,純度低轉化效率比純的質粒低很多;3.

轉化條件,如熱激冷激的溫度時間等;4.活化培養的條件,soc培養基優於lb培養基;5.塗布用的培養基及抗生素濃度等。

分子實驗報告根據本實驗認為影響轉化率的因素有哪些

3樓:雙槍老椰子

⑴、受體細胞

轉化的受體細胞一般是限制-修飾系統缺陷的突變株,即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變株,它可容忍外源dna分子進入體內並穩定地遺傳給後代。

另外還應根據載體的性質及實驗的目的選擇合適的宿主。

此外,受體細胞生長狀態和密度也很重要。不要使用經過多次轉接或儲存於4℃的培養菌。細胞生長密度以剛進入對數生長期時為好,密度過高或不足均會影響轉化率。

⑵、載體dna和重組dna方面

載體本身性質決定了轉化的高低,不同的載體dna轉化同一受體細胞,其轉化效率不同。載體的空間構象也有明顯影響,超螺旋結構的載體質粒往往有較高的轉化率,經體外酶切連線操作後的載體dna或重組dna由於空間上難以恢復,其轉化率常比cccdna低兩個數量級。對以質粒為載體的重組分子而言,分子量大的轉化效率低。

⑶、操作方面

感受態細胞的製備對轉化率影響較大。一般未經特殊處理的培養細胞對重組dna分子不敏感,難以轉化成功。為防止雜菌和雜dna的汙染,整個操作均應在無菌條件下進行,所有器皿最好是新的,並經高壓滅菌處理,所有試劑也都要滅菌處理。

⑷、轉化體系中重組dna的濃度與純度

轉化體系中重組dna的濃度與純度對轉化率也有一定影響。在一定濃度範圍內,濃度越高,轉化率越高,重組dna純度越高,轉化率越高。

⑸、外源基因與宿主染色體的同源性

外源基因**與宿主親緣關係越近,越易整合到宿主染色體中,轉化率越高,否則易被宿主核酸酶降解而降低轉化率。

T淋巴細胞與B淋巴細胞的區別

b淋巴細胞亦可簡稱b細胞。於骨髓的多能幹細胞。受抗原刺激後,會增殖分化出大量漿細胞。漿細胞可合成和分泌抗體並在血液中迴圈,發揮體液免疫的功能。b細胞的細胞膜上有許多不同的標誌,主要是表面抗原及表面受體。這些表面標誌都是結合在細胞膜上的巨蛋白分子。t淋巴細胞亦可簡稱t細胞。源於骨髓的多能幹細胞 胚胎期...

關於B淋巴細胞和T淋巴細胞的正確敘述A都是在骨髓中

上 t淋巴 細胞起源於骨髓中u造血幹細胞,但其成熟場所是胸腺,上錯誤 b b淋巴細胞和t淋巴細胞都不能產生抗體,b錯誤 c b細胞是在骨髓中發育成u,c錯誤 d b淋巴細胞是通過漿細胞產生抗體來發揮免疫作用u,t淋巴細胞是通過效應t細胞殺傷靶細胞發揮免疫作用u,d正確 故選 d 關於b淋巴細胞和t淋...

化學平衡轉化率的問題

增大濃度可以看成加壓,壓強增大平衡向分子數減小方向移動 即逆向移動 故轉化率減小 這個是因為轉換成n2和h2這兩種氣體,導致密閉空間內壓強增大,阻礙像氣體轉換。第一個式子,只看反應物和生成物的係數,左邊是2,右邊是1 1,也是2,像這樣的式子,左右兩邊係數相同的濃度和轉化率就不變。相反,看第二個式子...