1樓:匿名使用者
流式細胞術(flow cytometry, fcm)是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段,它可以高速分析上萬個細胞,並能同時從一個細胞中測得多個引數,與傳統的熒光鏡檢查相比,具有速度快、精度高、準確性好等優點。
將待測細胞染色後製成單細胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室,不含細胞的磷流式細胞術酸緩衝液在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度,這樣,鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,組成一個圓形的流束,待測細胞在鞘液的包被下單行排列,依次通過檢測區域。
流式細胞儀通常以鐳射作為發光源。經過聚焦整形後的光束,垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細胞在鐳射束的照射下,產生散射光和激發熒光。這兩種訊號同時被前向光電二極體和90°方向的光電倍增管接收。
光散射訊號在前向小角度進行檢測,這種訊號基本上反映了細胞體積的大小;熒光訊號的接受方向與鐳射束垂直,經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個不同波長的熒光訊號。
這些熒光訊號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度,經光電倍增管接收後可轉換為電訊號,再通過模/數轉換器,將連續的電訊號轉換為可被計算機識別的數字訊號。計算機把所測量到的各種訊號進行計算機處理,將分析結果顯示在計算機螢幕上,也可以列印出來,還可以資料檔案的形式儲存在硬碟上以備日後的查詢或進一步分析。
檢測資料的顯示視測量引數的不同由多種形式可供選擇。單引數資料以直方圖的形式表達,其x軸為測量強度,y軸為細胞數目。一般來說,流式細胞儀座標軸的解析度有512或1024通道數,這視其模數轉換器的解析度而定。
對於雙引數或多引數資料,既可以單獨顯示每個引數的直方圖,也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體檢視。
細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體,充電後振動,使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測定細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷,當液滴流經帶有幾千伏特的偏轉板時,在高壓電場的作用下偏轉,落入各自的收集容器中,不予充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實現細胞的分離。
流式細胞術 細胞凋亡 和週期有什麼區別嗎?原理有什麼不一樣啊?
2樓:匿名使用者
凋亡主要染ps和核,看象限。週期是看dna含量多少。週期要用酒精固定 凋亡不用固定。週期也能用pi染,凋亡也不一定用pi染。
流式細胞術的作用原理
3樓:匿名使用者
流式細胞術(flow cytometry, fcm)是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段,它可以高速分析上萬個細胞,並能同時從一個細胞中測得多個引數,與傳統的熒光鏡檢查相比,具有速度快、精度高、準確性好等優點。
將待測細胞染色後製成單細胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室,不含細胞的磷流式細胞術酸緩衝液在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度,這樣,鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,組成一個圓形的流束,待測細胞在鞘液的包被下單行排列,依次通過檢測區域。
流式細胞儀通常以鐳射作為發光源。經過聚焦整形後的光束,垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細胞在鐳射束的照射下,產生散射光和激發熒光。這兩種訊號同時被前向光電二極體和90°方向的光電倍增管接收。
光散射訊號在前向小角度進行檢測,這種訊號基本上反映了細胞體積的大小;熒光訊號的接受方向與鐳射束垂直,經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個不同波長的熒光訊號。
這些熒光訊號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度,經光電倍增管接收後可轉換為電訊號,再通過模/數轉換器,將連續的電訊號轉換為可被計算機識別的數字訊號。計算機把所測量到的各種訊號進行計算機處理,將分析結果顯示在計算機螢幕上,也可以列印出來,還可以資料檔案的形式儲存在硬碟上以備日後的查詢或進一步分析。
檢測資料的顯示視測量引數的不同由多種形式可供選擇。單引數資料以直方圖的形式表達,其x軸為測量強度,y軸為細胞數目。一般來說,流式細胞儀座標軸的解析度有512或1024通道數,這視其模數轉換器的解析度而定。
對於雙引數或多引數資料,既可以單獨顯示每個引數的直方圖,也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體檢視。
細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體,充電後振動,使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,待測定細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷,當液滴流經帶有幾千伏特的偏轉板時,在高壓電場的作用下偏轉,落入各自的收集容器中,不予充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實現細胞的分離。
流式細胞術的用途是什麼
4樓:文化永生
流式細胞術能在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多引數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞,並能同時從一個細胞中測得多個引數,具有速度快、精度高、準確性好的優點。
流式細胞分析儀臨床用於細胞**中心在facsvantage革命化的細胞分選功能基礎上推出的分選增強(sort enhanced edition,se),bd facsvantage se,其新功能和新配置通過與標準多鐳射多熒光系統以及資料處理系統的整合。
5樓:匿名使用者
細胞或者其他顆粒狀的物體可以被熒游標記的抗體或者替他熒光染料染色。當這些被標記的物體通過流式細胞儀的時候,鐳射照射,得到不同的激發光。
用途:1. 臨床診斷:比如白血病,淋巴瘤的分型,可以指導**。檢測幹細胞的百分率,可以判斷幹細胞**的效果等等
2. 實驗研究。根據前面所說的原理。只要可以被染色的,都可以用流式來分析。可以檢查各種抗原的含量。代謝狀態等等。
3. 細胞的分選。最後,根據染色的狀態,可以把不同的細胞篩選出來,進行下一步的研究。
流式細胞術散點圖引數中「FSC A」與「FSC H」是什麼意
fsc代表的是forward scatter,這個引數和細胞的大小成正比。a 是area的縮寫,h是height的縮寫。這是機器在記錄訊號時所採用的引數 不顯示在使用者介面,一般在除錯機器的時候可以顯示 每個細胞通過鐳射的時候,機器都會記錄一個波狀訊號 一個拱形的訊號 h就是這個拱的高度 代表的是訊...
流式細胞週期結果怎麼分析,如何看流式細胞週期結果圖?
細胞週期至少有兩種做法,最常見的如下圖分析 這個是brdu和7 aad方法檢測細胞週期。紅色的gate就是g1期,綠色的就是s期,橙色的就是g2 m期。brdu,pi,或者edu方法和這個一樣分析 如果單用pi等dna染料染色,需要專業軟體來分析計算了。比如這個圖,是dna染料單染,其中粉色部分是g...
求助,流式細胞學檢測T細胞亞群和NK活性
流式細胞術 flow cytometry,fcm 是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段,它可以高速分析上萬個細胞,並能同時從一個細胞中測得多個引數,與傳統的熒光鏡檢查相比,具有速度快 精度高 準確性好等優點。將待測細胞染色後製成單細胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動...