1樓：鵝子野心
操作步驟：
1 ．塗片
將培養的不同菌分別作塗片（注意塗片切不可過於濃厚），乾燥、固定。固定時通過火焰1一2 次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。
2 ．染色
( 1 ）初染加草酸鉸結晶紫一滴，約一分鐘，水洗。
( 2 ）媒染滴加碘液衝去殘水，並覆蓋約一分鐘，水洗。
( 3 ）脫色將載玻片上面的水甩淨，並襯以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止，約20 一30 秒鐘，立即用水衝淨酒精。
( 4 ）復染用番紅液染1 一2 分鐘，水洗。
( 5 ）鏡檢乾燥後，置油鏡觀察．革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準，過於密集的細菌，常常呈假陽性。
( 6 ) 同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合製片，作革蘭氏染色對比。
革蘭氏染色的關鍵在於嚴格掌握酒精脫色程度，如脫色過度，則陽性菌可被誤染為陰性菌；而脫色不夠時，陰性菌可被誤染為陽性菌。此外，菌齡也影響染色結果，如陽性菌培養時間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應。
原理：革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是1884 年由丹麥醫師gr 二創立的。
革蘭氏染色法（gram stain ）不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類：染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用g＋表示：染色反應呈紅色（復染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用g 一表示。
細菌對於革蘭氏染色的不同反應，是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚糖形成的網狀結構組成的，在染色過程中，當用乙醇處理時，由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小，通透性降低，使結晶紫一碘複合物被保留在細胞內而不易脫色，因此，呈現藍紫色；革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚糖含量低，而脂類物質含量高，當用乙醇處理時，脂類物質溶解，細胞壁的通透性增加，使結晶紫一碘複合物易被乙醇抽出而脫色，然後又被染上了復染液（番紅）的顏色，因此呈現紅色。
革蘭氏染色需用四種不同的溶液：鹼性染料（basic dye ）初染液；媒染劑（mordant ) ；脫色劑( decolorising agent ）和復染液（counter stain ）。鹼性染料初染液的作用象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣，而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫（crystal violet ）。
媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力，即以某種方式幫助染料固定在細胞上，使不易脫落，碘（iodine ) 是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細胞進行脫色，不同型別的細胞脫色反應不同，有的能被脫色，有的則不能，脫色劑常用95 ％的酒精（ethanol ）。復染液也是一種鹼性染料，其顏色不同於初染液，復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色，而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色，從而將細胞區分成g ＋和g 一兩大類群，常用的復染液是番紅。
2樓：林與潘
一、 目的：在細胞發放之前，利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測，判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。
二、 原理：
3樓：張鈺濤
步驟：包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟。
原理：染色後細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，而用以分類鑑定。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法，2023年由丹麥醫師gram創立。未經染色之細菌，由於其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，而用以分類鑑定。
革蘭氏染色屬復染法。
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(hans christian gram，2023年-2023年)於2023年所發明，最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。
未經染色之細菌，由於其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色後細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，而用以分類鑑定。
簡述革蘭氏染色的操作步驟
4樓：江南蜜汁
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：
1）塗片固定。
2）草酸銨結晶紫染1分鐘。
3）蒸餾水沖洗。
4）加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。
5）水洗，用吸水紙吸去水分。
6）加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，20秒後水洗，吸去水分。
7）蕃紅染色液（稀）染1分鐘後，蒸餾水沖洗。乾燥，鏡檢。
擴充套件資料革蘭氏染色法的意義就在於鑑別細菌，把眾多的細菌分為兩大類，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。
在**上，大多數革蘭氏陽性菌都對青黴素敏感（結核桿菌對青黴素不敏感）：大多數化膿性球菌都屬於革蘭氏陽性菌，它們能產生外毒素使人致病，可以選擇青黴素族，頭孢曲松鈉等。
革蘭氏陰性菌，大多數腸道菌多屬於革蘭氏陰性菌，它們產生內毒素，靠內毒素使人致病。而革蘭氏陰性菌則對青黴素不敏感，可以選擇氟喹諾酮類藥物如諾氟沙星，左氧氟沙星等，也可以選擇大環內酯類比如克拉黴素、羅紅黴素等。所以首先區分病原菌是革蘭氏陽性菌還是陰性菌，在選擇抗生素方面意義重大。
5樓：沐溪
革蘭氏染色法具體操作步驟：
塗片固定。
草酸銨結晶紫染1分鐘。
純化水沖洗。
加碘液覆蓋塗面染1分鐘。
水洗，用吸水紙吸去水分。
加95%酒精數滴，並輕輕搖動進行脫色，30秒後水洗，吸去水分。
番紅染色液（稀）染10秒鐘後，純化水沖洗。乾燥，鏡檢。
基本原理：革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是2023年由丹麥醫師gram創立的。
革蘭氏染色法（gram stain）不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類：染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用g+表示；染色反應呈紅色（復染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用g-表示。細菌對於革蘭氏染色的不同反應，是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。
器材：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌；草酸銨結晶紫，番紅水溶液，碘液，95%乙醇，載玻片，顯微鏡等。
革蘭氏染色法的原理
6樓：暴走少女
革蘭氏染色法的原理是通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙。
因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差。
在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
7樓：秦也抱只貓
簡單來說：通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細菌細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，再用95%乙醇脫色。
具體來說：通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故遇乙醇脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色;
而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差，在遇脫色劑後，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出，因此通過乙醇脫色後仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
g﹢菌:細胞壁厚，肽聚糖網狀分子形成一種透性屏障，當乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔隙縮小，故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。
gˉ菌:肽聚糖層薄，交聯鬆散，乙醇脫色不能使其結構收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結晶紫-碘複合物溶出細胞壁，番紅染液復染後呈紅色。
8樓：立鶴尾
g＋菌：細胞壁厚，肽聚糖網狀分子形成一種透性障，當乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。
gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯鬆散，乙醇脫色不能使其結構收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結晶紫-碘複合物溶出細胞壁，沙黃復染後呈紅色。
9樓：寵魅
革蘭氏染色法的原理是浸泡原理
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根據革蘭染色將細菌分為革蘭氏陰性菌 染成粉紅色 和革蘭氏陽性菌 染成紫色 染色步驟分為 初染，媒染，脫色，復紅 該染色法所以能將細菌分為g 菌和g 菌，是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。g 菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質，而且肽聚糖層較薄 交聯度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類...
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