1樓：南京金益柏
您的樣本若是測血漿，可以將收集的樣本置於含edta的lv管中，立即輕搖幾次防止凝固，然後將血樣轉移到含抑肽酶（0.6tiu/ml血樣)的離心管中，輕搖混勻，來抑制樣本中蛋白酶的活性，防止您所測定的物質降解。4度離心1600g，15分鐘，收集血漿，－70度儲存，半年的時間可以。
若是測定血清，離體的樣本（我們的做法）中加抑肽酶濃度同血漿的提取，室溫條件下過夜，取上清，然後離心再取上清。－70度儲存可用半年。
在這個過程中需要注意的是若elisa系統中用hrp顯色，則禁止使用疊氮鈉，因為其抑制酶的活性；還有就是樣本不能反覆凍溶，否則效價很快下降。
做elisa實驗前，事先收集好的標本該如何處理？
2樓：宰桂枝汗媚
1、取血後最好能放到37度水浴箱中1小時左右,這樣有助於纖維蛋白原凝集,在凍得時候也最好不要把血清和血細胞一起凍,血細胞反覆凍融會破碎,裡面的物質很容易混到血清中,而且血清凍後再放到室溫作試驗,實際上血清裡面會產生分層,你取得部分並不能代表血清整體情況,你做試驗前血清融化後需要混勻才可以,而你帶著血細胞怕不好混勻吧,所以我覺得最好不要一起凍
2、如何解凍血清才不會使產品質量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱取出後，先置於2～8℃冰箱使之溶解，然後在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規則地搖晃均勻。
3、血清解凍後發現有絮狀沉澱物出現，
該如何處理?
血清在解凍過程（包括沒有完全解凍）或儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等）可能會聚整合團，形成絮狀沉澱或外觀混濁；在運輸過程中，由於時間較長，所以往往有少許解凍，因此也可能稍有沉澱，但這些都不影響血清效能。若您欲去除這些絮狀沉澱物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾
做elisa檢測前各樣本該如何準備
3樓：南京金益柏
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天就進行 檢測的樣本，及時儲存在4℃備用。對於隔天再檢測的樣本，及時分裝後凍存在-20℃備用，有條件的，最好-70℃凍存備用。
標本應避免反覆凍融。
液體類標本:
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘後，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。儲存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
2. 血漿：
應根據標本的要求選擇edta、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘後，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。儲存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
3. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。儲存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
5. 培養細胞
檢測細胞內的成份時，用pbs（ph7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。
通過反覆凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
儲存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
6. 組織標本
切割標本後，稱取重量。加入一定量的pbs，ph7.4。
用液氮迅速冷凍儲存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的pbs（ph7.
4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
分裝後一份待檢測，其餘冷凍備用。
elisa樣品準備問題
4樓：糟油酒丸
哇，大家都曾經盲目過啊，patpat振作一下。
現在的情況是恐怕你無法使用該試劑盒和你的血清樣本取得適宜於發表的資料。因為即使你做這個實驗，你也說不清楚你的樣本里面有多少opn已經降解了，所得的測量值理論上來說不能很好的反映你需要研究的原始opn濃度。
當然，如果現在這個試劑盒買了也是買了，不用掉也是浪費，等不及把它用在其他按要求採集的血漿樣本上，你還是可以拿它來做以下實驗，考慮一下你自己的時間和精力，值不值得這麼做吧：
1。碰碰運氣--如果出於神祕的原因你的血清樣本中opn沒有損失或損失很小，那麼你還是可以做這個實驗。為了證明這一點，你可以用一個新的確定為陽性的捐獻者，取血分兩份，分別按照你的老辦法制備血清，和按照elisa建議辦法制備血漿。
然後用該試劑盒測試，對比兩份樣本的結果。如果結果相近，則說明你的血清製備辦法不影響opn，你可以按原計劃做你的實驗。
但這個實驗也有個問題--同樣體積的全血，則opn數量固定，血清和血漿體積差異可能造成兩個樣本濃度不同，而且你的血漿要加pmsf，也是改變濃度的因素。所以到底最後結果相差多少視為可以接受，需要考慮一下。
同時你可以將已知濃度的重組opn(試劑盒中帶來的)，加到你某個待測的血清樣本中（不重要的或備有多餘分量的），同未加重組蛋白的同一個樣本，還有等量重組蛋白加到普通稀釋緩衝液中，三組同時測試，前兩個結果差值是否為計算出來的opn濃度，該差值是否與第三個結果相同。這樣可以證明，在你的血清樣本中，opn到底會不會降解。但這裡的問題是加完到底應該孵育多久，在什麼溫度下孵育。
理論上應該比照你的血清樣本製備過程的溫度和時間。這裡假定重組opn與天然opn在血清中的降解反應一樣。
2。以上都是為了回答一個問題就是你的血清樣本能不能用。但如果你的實驗只是為了比較差異，不太在乎基準值，你還是可以不管三七二十一地就用這些樣本測了。
得到的結果對你私下來分析還是有參考價值--即你還是可以知道某些病人是否opn比另外一些病人高，病人**前後opn是變高了還是變低了。但是這樣有個前提是你的opn只是降解濃度變低了，沒有低到測不到的地步。。。你也可能測了一通，血清樣本用光光了（本來血清樣本可能還可以有別的用途），啥也沒測到。。。
elisa實驗血清標本不夠，如何處理？ 50
5樓：匿名使用者
我想問問 你們用的什麼管
是矽嬌那種嗎？
估計不是，如果是一般的生化管離心後 量少
你可以拿個細點的管 比如一次性滴管 倒過來離心 會得到多一些的血清
做elisa實驗需要注意一些什麼？
6樓：南京金益柏生物科技****
elisa實驗中應該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題,希望對你有用處.
elisa試劑盒有著準確性高、靈敏度高、特異性強的諸多優點,深受廣大使用者朋友的喜愛.然而,在實驗過程中,也需要注意很多問題.對此,武漢福來生物工程提醒你,需要遵守一些規則,才能更好地進行實驗,取得較好的實驗成果.
elisa方法被廣泛應用於各種抗原和抗體測定.在elisa測定中影響因素較多,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果.引起elisa測定錯誤結果的原因主要有：
標本因素；試劑因素；操作因素.
1．樣品稀釋
一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性.酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性.
2．試劑盒平衡
elisa中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,elisa反應不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.
3．樣品和試劑的混勻
在稀釋前、後的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性.
4．加樣
加樣是一項很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸附.
5．溫育
溫育是elisa測定中影響測定成敗最為關鍵的一個因素.elisa作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間.
6．洗板
固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術,需以洗滌操作將特異結合於固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證elisa測定的特異性.洗液儘量不要溢位孔外；加洗液後要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液後,一定要大力拍幹；及時更換吸水紙,尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果.
7．顯色
顯色一定要控制時間,根據試劑盒說明操作即可.一般來說,顯色時間過短,結果偏低；顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加.
8．比色
比色要注意波長的選擇.以tmb為底物和以opd為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,後者為492nm,濾光片需根據要求隨時更換.因此,容易出現濾光片錯用的問題.
7樓：萊特資訊科技****
1 臨床標本的收集和儲存
用於elisa測定的臨床標本最為常用的是血清（漿）。本實驗室用elisa測定乙肝兩對半，甲肝，戊肝，抗hiv的標本時，在處理和儲存方面要考慮以下幾個方面： 1） 要注意避免出現嚴重溶血及血清中混有紅細胞。
當標本出現嚴重溶血及血清中混有紅細胞時，反應孔不易洗淨，殘留在反應孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶的活性，顯色時可能造成假陽性。 2） 標本凝固不全強行離心，造成血清中含有少量的纖維蛋白原，在實驗過程中形成纖維蛋白吸附在反應孔孔壁上不易洗掉，易造成假性結果。 3） 血清標本可在2～8℃下儲存1周。
如血清樣本需長時間儲存，則需放入-20℃冰櫃內冰凍儲存。冰凍儲存的血清標本須注意避免反覆凍融，標本可能引起假陰性結果。此外凍融標本的混勻不要進行劇烈振盪，應反覆顛倒混勻。
2 elisa 測定中試劑準備
在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上後，再 進行測定，證試劑盒溫度要和室溫一致。如果把試劑盒從冰箱拿出來直接做實驗會造成一些弱陽性標本的檢測出現假陰性。因為在後面的孵育反應步驟中，造成孵育時間不夠。
其次，elisa實驗中洗板用的洗液需每日更換配製，稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。
3 加血清樣本及反應試劑
血清樣本使用微量加樣槍加樣。使用微量加樣槍加樣必須注意避免以下幾點： 1） 加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。
需勻速加樣，吸樣時，加樣槍需按到第一檔，加樣時，加樣槍需直接按到底。 2） 加樣應直接加入反應孔底部，加在反應孔孔壁上易濺出會對鄰近孔產生汙染。儘量避免出現氣泡。
3） 反應試劑的加入時先要注意試劑的有效期，再注意滴加的角度和滴加的速度。滴加太快易出現重複滴加或加在兩孔之間.
4 溫育的時間與溫度
溫育是elisa測定中最容易出現問題的步驟。溫育溫度應在37℃，水浴。溫育時間應按照試劑說明書上的時間嚴格執行。
溫育實際測定操作中要注意以下幾點： 1）要保證在設定的溫度下有足夠的反應時間。溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來 。
2）因為採用水浴，所以在溫育時一定要封板，防止水蒸氣形成水滴掉入反應孔內造成汙染，並有可能整板花板。
5 elisa測定的洗板
全自動洗板機的使用應注意以下幾點： 1） 洗板前，應檢查洗液瓶、蒸餾水瓶是否充足，廢液瓶是否滿瓶。2） 在自檢過程中注意觀察洗液灌注是否通暢，排液是否通暢。
3） 在洗板過程中，應注意觀察反應孔每孔是否灌滿且無外溢，每孔吸水是否吸盡，並且要保證洗液在孔中放置的時間。
6 elisa測定以tmb為底物的顯色
加入底物開始顯色反應前，最好是先檢查一下底物溶液的有效期。滴入a、b顯色劑後，需溫育15min，最後加入終止液終止反應，振盪混勻後即可進行下面的比色測定判斷結果。在此過程中應注意不要把顯色劑和終止液滴入順序弄反，否則重做實驗。
7 elisa的比色測定
elisa的比色測定由酶標儀進行測定，故需強調比色測定時，一定要注意酶標儀的波長是否是雙波長（450nm和630nm）。
8 elisa測定結果判定
結果判定一般是根據比色結果和肉眼觀察綜合判定。如在判定過程發現有些反應孔出現倒陰不陽的現象或出現不常見的模式（如乙肝兩對半中出現12陽性等），需本著嚴謹的態度，重新複查。
對elisa測定中出現問題的可能原因（非試劑盒本身的原因），總結如下： 1)弱陽性質控樣本檢測不出溫育的時間或溫度不夠；顯色反應時間太短；所用配製緩衝液的蒸餾水有問題。
2）測定的重複性差 ，這是由於測定操作引起的問題，包括 ①加樣本及試劑量不準；孔間不一致 ②加樣過快，孔間發生汙染 ③加錯樣本 ④加樣本及試劑時，加在孔壁 ⑤不同批號試劑盒中組分混用 ⑥溫育時間、洗板、顯色時間不一致 ⑦孔內汙染雜物，血清標本未完全凝固即加入，反應孔內出現纖維蛋白凝固或殘留血細胞，易出現假陽性等。 3）全部孔都不顯色 ① 漏加酶結合物； ② 洗板液配製中出現問題 ③ 漏加顯色劑a或b ④ 終止劑當顯色劑使用 4）全部板孔均有顯色 ① 板不乾淨 ② 顯色液變質 ③ 洗板液受酶等汙染
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