IL2活性測定問題,IL2活性測定問題

1樓：天哪都被註冊了

結果統計學處理

所有數值以x±s表示，應用spss軟體進行方差分析，p<0.05時為相差顯著，p<0.01時為相差非常顯著。

可以以時間為橫軸，光吸收值為縱軸繪製細胞生線，專門公式求ic50。或計算抑制率。細胞死亡率%=od對照組-od實驗組/od對照組

excel表中可以做兩兩比較的t-test,這個你可以參考一下；你的資料應該用多個樣本均數的t-test，方差分析也可。用的軟體是spss或者sas。

孔板的重複利用:

培養板要用好的（最好進口板），不好的板或重複利用的板只可做預實驗。一般貼壁生長的細胞用重複利用的培養板效果不是很好，因為培養板表層在生產時塗有一層促進細胞貼壁的物質，在清洗後多半會失去。懸浮或是半懸浮生長的細胞還可以。

建議不要用太多次，即使是進口的板子使用次數也不要超過3次,底值最好在測得值的1/3一下。

強烈建議培養板不要重複使用:1、泡酸是可以，但是泡完酸的板子很不利於細胞的生長，會出現帖壁不好，細胞生長緩慢等情況.2、這樣的板子消毒滅菌很不徹底，如果有萬一,則因小失大.

3、重複用的板子洗不乾淨在培養過程中易出現雜質.

重複利用時

做法1：

洗淨後用2％naoh浸泡4小時，再用1％稀鹽酸浸泡4小時，沖洗15遍，蒸餾水沖洗3遍，烘乾，uv照射過夜(紫外2小時以上消毒即可)

做法2:

泡酸2－4小時，老師讓我們別超過4小時，（普通的玻璃儀器是過夜）。撈出，沖洗乾淨，烘乾後，uv 照射過夜。估計跟其他收集在一起，鈷60照射消毒.

做法3:

1.做完mtt後用大水流盡量將板衝淨，然後用洗衣粉水泡幾個小時（小心最好讓洗衣粉先化開）。2.

用自來水衝淨洗衣粉水，倒扣晾乾.3.重鉻酸鉀加濃硫酸配成的酸液中浸泡過夜泡洗液(六小時以上即可)後自來水洗淨（20次左右）每個孔都要處理4.

用去離子水沖洗3遍，雙蒸水沖洗3遍，烤乾5.超淨臺中紫外線照射2個小時左右，就可以用了，不可以高壓。

做法4:

1、測完值的96孔板甩掉孔內培養液，放入超聲中超10-30分鐘，晾乾(或烘乾)備用。

此步驟可最大程度的洗去汙垢及細胞。

2、每孔加入50-100ul的胰酶(0.05%)，我一般加60ul，加完胰酶後水平振盪96孔板以使胰酶均勻覆蓋於細胞表面，室溫下放置至細胞被消化脫落為止。假如你想消化快一點的話可將96孔板放到37度培養箱內(胰酶在37度時的活力最大)。

對於頑固貼附在壁上的細胞，此步驟最為有效。

3、甩掉胰酶，自來水下衝洗，晾乾(或烘乾)備用。

如果不烘乾就泡酸，那麼96孔板殘留的水分將稀釋酸液，長期以往泡酸的效果下降。

4、將晾乾的96孔板泡酸(中強酸)過夜，撈起後自來水下衝洗10遍；雙蒸水沖洗3遍。三蒸水沖洗3遍。烘乾備用。泡酸時特別注意時間不要太長了，否則板子變黃，影響最後的od值的測定。

5、做實驗前，96孔板至少在紫外燈下照射30分鐘，但不能長期照射。紫外線長期照射可使板變黃，我的兩塊板放在超靜臺上忘了拿出來，一直照了兩個星期，等我從超靜臺上取出板已經變成黃色。

注：1、在實驗中若你測得某一個孔的數值偏高，雖然有很多因素會導致數值偏高，但是如果是板底的汙點引起的話你可以消除。拿出96孔板擦一擦值偏大孔的板底部，再測值。

你會發現孔高的值又會到正常水平。因為咱們做實驗時手不可避免的接觸96孔闆闆底留下痕跡，這些痕跡就會使吸光度升高。

2、96孔板洗的次數多了，板底自然留下劃痕，這就會導致讀數的不均而影響實驗結果。你不妨在做實驗前測一次96孔板的值(此值為初值)，實驗測得的為後值。後值減去初值就接近實驗的真實值。