如何區分轉入了熒光蛋白的細菌和一般細菌，因為在熒光顯微鏡下都

1樓：匿名使用者

質粒上標一個抗性基因吧培養基加青黴素沒轉進去的就掛了

體外純化的熒光蛋白可以在熒光顯微鏡下觀察嗎

2樓：匿名使用者

觀察到的

bai細胞都是弱du的黃色，可能是自發zhi熒光。如果很dao

強，則是表達版很強的結果。弱的熒光權.並且每個細胞都是黃色。

一個細胞轉染的是編碼綠色熒光蛋白的空載體，一個是連線有目的基因片段的重組載體。空載體的細胞綠色熒光在胞質內分佈，很正常；而重組載體的細胞則只有胞膜上有黃色弱熒光。當細胞狀態不好時，就可能有自發熒光出現，這種自發熒光在看綠色熒光蛋白時顯示偏黃色，可能是沒有轉染進去。

本來是綠色熒光蛋白，我操作時，熒光顯微鏡下看到看的是紅色，怎麼回事？請高人指教一下！

3樓：匿名使用者

有可能是激發塊用錯了，你應該用b激發，可能用成uv或v的了。

為什麼康寧24孔細胞培養板觀察黃色熒光蛋白在熒光顯微鏡下會發熒光

4樓：豆腐i哦愛哦

倒置相差顯

bai微鏡組成和普

du通光學顯微鏡一樣，只

zhi不過物dao鏡與照明系統顛內倒，前者在載物臺之下，後容者在載物臺之上，用於觀察培養的活細胞，具有相差物鏡．

倒置相差顯微鏡具有兩個其他顯微鏡所不具有的功能：①將直射的光（視野中背景光）與經物體衍射的光分開；②將大約一半的波長從相位中除去，使之不能發生相互作用，從而引起強度的變化；故選c

熒光顯微鏡下紫外光能看到什麼熒光蛋白

5樓：匿名使用者

觀察到的細胞都是bai弱的黃色，du可能是zhi自發熒光。如果

dao很強，則是表達很強的結果。專弱的熒光.並且每

屬個細胞都是黃色。一個細胞轉染的是編碼綠色熒光蛋白的空載體，一個是連線有目的基因片段的重組載體。空載體的細胞綠色熒光在胞質內分佈，很正常；而重組載體的細胞則只有胞膜上有黃色弱熒光。

當細胞狀態不好時，就可能有自發熒光出現，這種自發熒光在看綠色熒光蛋白時顯示偏黃色，可能是沒有轉染進去。

為什麼兩臺熒光顯微鏡看到的熒光蛋白不一樣

6樓：匿名使用者

（1）利用有色熒光蛋白標記技術進行蛋白定位研究

此法也可稱為活細胞定位.把兩種具有相互作用的蛋白分別克隆到帶有兩種不同顏色熒光

蛋白（綠色熒光蛋白或紅色熒光蛋白）的載體中,共轉染到功能細胞中（一般選用 cos7 細胞）表達帶有熒光的融合蛋白.這樣,相互作用的兩種蛋白就被標上不同的熒光,可以在細胞內用熒光顯微鏡直接觀測.在進行精確細胞定位或共定位時,必須用共聚焦熒光顯微鏡觀測.

因為共聚焦熒光顯微鏡（相當於醫院給病人診斷的 ct）觀測的是細胞內一個切面上的顏色.如果在一個切面上在同一區域看到兩種顏色,就提示這兩種蛋白在該區域內有相互作用.普通熒光顯微鏡看到的是一個立體圖象,無法確定蛋白質共定位現象.

在進行定位或共定位同時,也可以對細胞核進行染色.這樣,在細胞中就有三種顏色.細胞核的顯色幫助你確定共定位發生的位置.

上面介紹的活細胞定位,其優點是表達的熒光蛋白熒光強,沒有背景,觀測方便.但缺點

是相互作用的蛋白由於標上熒光蛋白,實際上是兩個融合蛋白.融合蛋白的定位結果或共定位結果是否與天然蛋白分佈一致,有待於進一步確定.而利用免疫熒游標記技術可以避免這一缺點.

（2）利用雙色或多色染色的免疫熒光技術進行蛋白定位研究

免疫熒光的原理是,首先把細胞進行固定,然後用待檢測靶蛋白的抗體（一抗）與細胞內

靶蛋白進行免疫反應,再用熒光素（如 fitc 和 tritc 等）標記的二抗與一抗進行反應.這樣就在細胞內形成免疫複合物（靶蛋白----一抗---二抗）,結果靶蛋白被標上顏色,然後可用共聚焦熒光顯微鏡觀測定位與共定位結果.

免疫熒光技術最大優點就是可用來檢測細胞內源性蛋白的定位及相互作用.當然也可以對

靶細胞進行轉染表達目的蛋白,然後標記目的蛋白進行觀測.免疫熒光技術的缺點是熒光相對較弱並且背景較高,結果受到干擾,所以這項技術不好掌握.為了結果的可靠性,要求嚴格設計陽性對照與陰性對照.

（3）細胞內蛋白動態定位

有時細胞在正常狀態下,有相互作用的蛋白在胞內可能暫時分開,沒有共定位現象發生.

但是在某一個特定情況下,如細胞受到外界刺激時,細胞本身會產生應急反應,這時暫時分離的蛋白有可能發生相互作用,併產生共定位現象.所以在進行共定位研究時,可根據具體情況具體分析,必要時觀測細胞內蛋白動態定位結果.