1樓：凝若嵩汐
入門的話bai
最好不要看文du獻吧 因為文獻中的都是zhi比較深dao的 是在基礎之上後版人的研究 你想學的權話 建議看看基因工程原理 基因克隆和dna分析方面的書籍 那些是比較基礎的 只有把基礎的東西弄明白了 你才能看懂文獻 我現在也是在學習。。。
請問有設麼關於質粒構建、引物設計的文獻可以看嗎
2樓：匿名使用者
質粒構建看分子克隆、分子生物學即，知道什麼是質粒載體就該會的。
引物設計看一本pcr方面的專著即可。
質粒構建的引物是什麼
3樓：匿名使用者
如果是需要把一個特定的基因片段擴增後，插入到載體上構建質粒，則要根據載體上多克隆位點帶有的酶切位點，在自己的目標基因片段上下游都分別設計一段序列，並在設計的序列中引入載體上的酶切位點。這個時候設計出來，用於完成pcr擴增，並能夠在目標序列上下游都引入酶切位點的兩段序列就叫做質粒構建引物。
這樣擴增獲得的目標片段兩端就帶有了酶切位點，經過酶切後，與同樣經過酶切的載體就可以連到一起，形成環狀，完成質粒的構建。
4樓：匿名使用者
取決於你的片段.............
很想知道質粒構建的詳細步驟？
5樓：匿名使用者
1. 通過pcr擴增目的基因片段
pcr要設計
引物，設計引物時要選擇合適的同源序列，根據質粒載體和基因序列要選擇合適的酶切位點，pcr的產物要純化。
2. 酶切
根據引物設計的酶切位點，分別對pcr產物和質粒載體進行酶切，酶切後的產物也要進行**
3. 連線
通過連線酶將酶切後的pcr產物和質粒載體進行連線4. 轉化
將連線產物轉化到受體菌中（一般為dh5a），塗板，培養過夜5. 挑取單克隆，並鑑定
挑去平板上的單克隆培養，可以通過pcr或者酶切初步鑑定陽性克隆，對初步鑑定出來的陽性克隆進行測序
6樓：匿名使用者
質粒的構建有很多方法，如果是pcr產物連線到t載體則使用t-a策略，如果是酶切連線剛需要t4連線酶進行連線。
你要是有天根全式金載體連線說明書就明白了。
一個目的基因在質粒上，如何將其擴增出來並做實時熒光定量pcr？
7樓：rain丶
是這樣的，pcr的原理就不闡述了，實時熒光定量pcr的基本原理是，在pcr體系中，加入引物的同時，加入能與目的基因結合的帶熒游標記的寡核苷酸，一條完整的寡核苷酸上有熒光淬滅基團，它能吸收熒光訊號。 dna聚合酶要選擇具有3'到5'外切酶活性的酶，這樣在pcr擴增過程中，從引物方向過來的dna聚合酶會把寡核苷酸一個個切掉，在切掉之後，淬滅基團被破壞，熒光訊號散發出來被儀器接收，每複製一條dna就產生一個熒光訊號，熒光訊號累積就能與pcr產物同步，這樣就是跟蹤pcr產物。
樓主提取質粒以後需要經過一次瓊脂糖凝膠電泳定量，然後對質粒進行稀釋，稀釋到適當濃度，不然無法確定需要加多少dna模版在才能滿足反應體系的要求，引物設計沒有別的要求，只要能完整擴出樓主想要的基因就行。定量的話，根據機器收到的熒光訊號就可以定量了。
以上僅個人愚見。
8樓：哼笨蛋蛋
引物當然要有酶切位點啦，這個是必要的，還需要有保護鹼基還有和目的基因對應的差不多有20個鹼基
重組質粒構建的注意事項？
9樓：匿名使用者
重組質粒構建是常用的分子生物學手段，其實只是最基本的方法，一般一個星期同時構建三二個組質粒是沒有問題的。在國內先進的實驗中，也大都是由實驗員搞定。但是其中還是有些基本的技巧需要掌握。
在這裡將我的心得分享於大家，這也是我本人幾年來一線工作時的經驗積累，以期能為谷友提供借鑑，讓大家在實驗中少走彎路。所涉及內容如下：
1) 克隆基因的酶切位點問題
2) 載體酶切的問題
3) 連線片段濃度比的問題
在闡明上述問題同時，本人儘可能舉些實驗中的問題案例予以說明。
一、克隆基因的酶切位點問題
1、克隆位點選擇的問題。首先要對目標基因進行酶切位點掃描分析，列出其所含酶切位點清單。然後對照質粒多克隆位點，所選擇的克隆位點必須是目標基因所不含的酶切位點。這是常識，不贅述。
2、保護鹼基數目的問題。在設計pcr引物時，引入酶切位點後，常常要加入保護鹼基，這是大家所熟知的。但是保護鹼基數量多少，可能被新手所忽視。
這種忽視碰可能會大大影響後續的實驗進展。
一般情況下，普通的內切酶只加入兩個保護鹼基，其內切反應就可以正常進行；而有一類，僅僅只加入兩個保護鹼基，其內切反應就不能正常進行，這是因為內切酶不能正常結合dn段上。如ndei就屬這類，需要加入至少6個保護鹼基，常用的hindiii也要三個。
10樓：匿名使用者
選擇合適的內切酶，作用時間和溫度要適宜，連線過程中不要汙染，注意片段和質粒的比例
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