1樓:匿名使用者
我們一般半微量用0.02n定氮儀用0.2n的鹽酸,標定鹽酸做5個平行樣,加一個空白,如果操作仔細的話,平行樣相差很小,在小數點後三位數之後,濃度取平均值,可以去掉相差較大的平行樣。
實際加的鹽酸應該比國標上的少,配出來才會接近需要的值。
2樓:匿名使用者
這個好像和你蛋白含量有關,如果蛋白含量比較高的話一般會用0.2的,一般情況下記憶裡標定後是0.1043左右的樣子吧
3樓:匿名使用者
標定時做四個平行樣,極差再0.5%以內至於標定的結果,如果你再配製時移取的鹽酸數量很精卻的話,那偏差不會很大,保留四位小數(0.1000),只有最後一位或2位有差、如果不確定標定結果是否準確,那可以用硫酸銨檢測ps範圍值再20.
98-21.38之間
國家標準檢測蛋白質含量測定方法
4樓:匿名使用者
蛋白質含量測定方法就是檢測n元素的含量,像三聚氰胺的問題,就是通過增加n的含量使「蛋白質」含量提高的。
國家標準檢測蛋白質含量的方法叫做凱氏定氮法,食物中的蛋白質在催化加熱條件下分解,導致氨和硫酸結合產生硫酸銨。 鹼蒸餾採用無硫,硼酸吸收,用硫酸或鹽酸標準滴定溶液滴定,根據酸耗計算氮含量,再乘以轉化係數,即蛋白質含量。
具體操作步驟如下:
1.樣品處理
精確稱量0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸收10-20ml液體樣品(約30-40mg氮當量)。
將其轉移至乾燥的100毫升或500毫升氮氣固定瓶中,加入0.2克硫酸銅,6克硫酸鉀和20毫升硫酸,輕輕搖動,在瓶口放置一個小漏斗,將瓶子傾斜石棉網上有45度角,有小孔。
加熱小火後,內容物碳化,泡沫完全停止,加強火力,保持瓶內液體稍微沸騰,直至液體呈藍綠色澄清透明,然後繼續加熱0.5小時。取出並冷卻,小心加入20毫升水,冷卻,移入100毫升容量瓶中,用少量水洗淨氮氣瓶,洗淨液放入容量瓶中,然後用水沖洗至刻度,混勻備用。
取相同量的硫酸銅,硫酸鉀和濃硫酸作為試劑進行空白試驗。然而,這種方法很危險,很難在實驗室中證明。大多數實驗室都有一個消化器,可以一次處理16個以上的樣品和一個可以自行設定溫度的呼吸機。
它更安全,更可操作。
2.裝好定氮裝置
根據附圖安裝氮固定裝置。 在約2/3的水蒸氣發生器中加入幾滴甲基紅指示劑和幾毫升硫酸以保持水呈酸性。 新增幾個玻璃珠以防止突然沸騰。 蒸汽發生瓶中的水由壓力調節器加熱。
3.向接收瓶內加入試劑
將10ml 2%硼酸溶液和一滴混合指示劑加入到接收瓶中,並將冷凝管的下端插入液麵下。將10.0ml樣品消化液從小玻璃吸收到反應室中,用10ml水洗滌小燒杯以流入反應室,並擰緊小玻璃棒玻璃塞。
將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯中,抬起玻璃塞使其緩慢流入反應室,不能立即將玻璃蓋塞緊,這樣容易使玻璃塞粘在樣品入口處,應先用蒸餾水清洗然後蓋上,並在小玻璃杯中加水以防止洩漏。
夾緊螺旋夾並開始蒸餾。蒸汽進入反應室,氨通過冷凝管進入接收瓶。蒸餾持續5分鐘。
移動接收瓶,使冷凝管的下端離開液體容器,然後蒸餾1分鐘,然後用少量水沖洗冷凝管下端的外端。取下接收瓶,將其置於0.05n硫酸或0.
05n鹽酸標準溶液中,以灰色或藍紫色為目的地。
擴充套件資料
除了凱氏定氮法以外,標準的測量方法還有:
分光光度法
食品中的蛋白質在催化加熱條件下被分解,分解產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨,在ph4.8的乙酸鈉-乙酸緩衝溶液中與乙醯丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙醯-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長400nm 下測定吸光度值,與標準系列比較定量,結果乘以換算係數,即為蛋白質含量。
燃燒法樣品在900~1200℃下燃燒。在燃燒過程中,產生混合氣體。 諸如碳,硫和鹽的干擾氣體被吸收管吸收,氮氧化物被還原成氮。 形成的氮氣流由熱導檢測器(tcd)檢測。
5樓:life大林子
蛋白質含量測定主要有五
種方法,分別是凱式定氮法、雙縮脲法、紫外吸收法、酚試劑法和考馬斯亮藍法。
1.凱氏定氮法:
蛋白質是含氮的化合物。食品與濃硫酸和催化劑共同加熱消化,使蛋白質分解,產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨,留在消化液中,然後加鹼蒸餾使氨遊離,用硼酸吸收後,再用鹽酸標準溶液滴定,根據酸的消耗量來乘以蛋白質換算係數,即得蛋白質含量。因為食品中除蛋白質外,還含有其它含氮物質,所以此蛋白質稱為粗蛋白。
2.雙縮脲定氮法:
在強鹼性溶液中,雙縮脲與cuso4形成紫色絡合物,稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連線的肽鍵,或能過一箇中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應。紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。
測定範圍為1~10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有:硫酸銨、tris緩衝液和某些氨基酸等。
3.紫外吸收定氮法:
蛋白質分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,使蛋白質具有吸收紫外光的性質。形成顏色產物的量取決於蛋白質的濃度。實際測定時,必須預先用標準蛋白質溶液製作一個標準校正曲線,通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質標準溶液。
不同濃度的標準蛋白質溶液加入雙縮脲試劑後,反應生成的顏色產物用紫外-可見分光光度計在540nm 波長下測定吸光度,以雙縮脲試劑加緩衝或水作空白對照。然後將測得的值分別對蛋白濃度(mg/ ml) 作圖,得標準曲線。
未知蛋白樣品用雙縮脲試劑做同樣處理,根據測得吸光度值在標準曲線上直接查得未知蛋白質樣品中得蛋白質濃度。進行紫外吸收法測定時,由於蛋白質吸收高峰常因ph的改變而有變化,因此要注意溶液的ph值,測定樣品時的ph要與測定標準曲線的ph相一致。
4.酚試劑法:
此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即folin —酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深藍色的原因是:
①在鹼性條件下,蛋白質中的肽鍵與銅結合生成複合物。
②folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產生深藍色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。在一定的條件下,藍色深度與蛋白的量成正比。
5.考馬斯亮藍法:
考馬斯亮蘭g-250染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置(λmax),由465nm變為595nm,溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色。經研究認為,染料主要是與蛋白質中的鹼性氨基酸(特別是精氨酸)和芳香族氨基酸殘基相結合。在595nm下測定的吸光度值a595,與蛋白質濃度成正比。
擴充套件資料
檢查過程
(1) 標準法制定標準曲線 取14支試管,分兩組按下表a平行操作。 繪製標準曲線:以a595nm為縱座標,標準蛋白含量為橫座標,在座標紙上繪製標準曲線。
(2) 微量法制定標準曲線 取12支試管,分兩組按下表b平行操作。 繪製標準曲線:以a595nm為縱座標,標準蛋白含量為橫座標,在座標紙上繪製標準曲線。
(3) 未知樣品蛋白質濃度測定 測定方法同上,取合適的未知樣品體積,使其測定值在標準曲線的直線範圍內。根據所測定的a595nm值,在標準曲線上查出其相當於標準蛋白的量,從而計算出未知樣品的蛋白質濃度(mg/ml)。
6樓:匿名使用者
1、凱氏定氮法
通過該方法測定出的蛋白質被稱為「粗蛋白」,氮的**有可能是真蛋白質、乳製品中正常含有的非蛋白質類化合物,也極有可能來自人為故意新增的有害含氮物質。
2、高效液相色譜法
試樣用三氯乙酸溶液-乙腈提取,經陽離子交換固相萃取柱淨化後,用高效液相色譜測定,外標法定量。
高效液相色譜測定步驟
(1)hplc 參考條件
(2)標準曲線的繪製
(3)定量測定
(4)結果計算
3、液相色譜-質譜/質譜法
試樣用三氯乙酸溶液提取,經陽離子交換固相萃取柱淨化後,用液相色譜-質譜/質譜法測定和確證,外標法定量。
液相色譜-質譜/質譜測定步驟:
(1)lc 參考條件
(2)ms/ms 參考條件
(3)標準曲線的繪製
(4) 定量測定
(5)定性判定
(6)結果計算
4、氣相色譜-質譜聯用法
試樣經超聲提取、固相萃取淨化後,進行矽烷化衍生,衍生產物採用選擇離子監測質譜掃描模式(sim)或多反應監測質譜掃描模式(mrm),用化合物的保留時間和質譜碎片的丰度比定性,外標法定量。
氣相色譜-質譜測定步驟
(1)儀器參考條件
(2) 標準曲線的繪製
(3)定量測定
(4)定性判定
(5)結果計算
人民網-食品中三聚氰胺檢測標準即將出臺
7樓:星空
國家標準檢測蛋白質含量測定方法是滴定法。
8樓:匿名使用者
使用凱氏定氮的方法檢測蛋白質含量。
凱氏定氮法 凱氏定氮法
蛋白質測定的國標規定方法——凱氏定氮法介紹
【gb/t 5009.5—1985】
食品中蛋白質的測定方法
本標準適用於各類食品中蛋白質的測定。
1 原理
蛋白質是含氮的有機化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨遊離,用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據酸的消耗量乘以換算係數,即為蛋白質含量。
2 試劑
所有試劑均用不含氨的蒸餾水配製。
2.1 硫酸銅。
2.2 硫酸鉀。
2.3 硫酸。
2.4 2%硼酸溶液。
2.5 混合指示液:1份0.
1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份0.
1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。
2.6 40%氫氧化鈉溶液。
2.7 0.05n硫酸標準溶液或0.05n鹽酸標準溶液。
3 儀器
定氮蒸餾裝置:如圖所示。
(圖略)
4 操作方法
4.1 樣品處理:精密稱取0.
2~2.0g固體樣品或2~5g半固體樣品或吸取10~20ml液體樣品(約相當氮30~40mg),移入乾燥的 100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸銅,3g硫酸鉀及20ml硫酸,稍搖勻後於瓶口放一小漏斗,將瓶以45°角斜支於有小孔的石棉網上。
小心加熱,待內容物全部炭化,泡沫完全停止後,加強火力,並保持瓶內液體微沸,至液體呈藍綠色澄清透明後,再繼續加熱0.5h。取下放冷,小心加20ml 水。
放冷後,移入100ml容量瓶中,並用少量水洗定氮瓶,洗液併入容量瓶中,再加水至刻度,混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白試驗。
4.2 按圖裝好定氮裝置,於水蒸氣發生瓶內裝水至約2/3處,加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入數粒玻璃珠以防暴沸,用調壓器控制,加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水。
4.3 向接收瓶內加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴,並使冷凝管的下端插入液麵下,吸取10.0ml樣品消化稀釋液由小玻杯流入反應室,並以10ml水洗滌小燒杯使流入反應室內,塞緊小玻杯的棒狀玻塞。
將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻杯,提起玻塞使其緩緩流入反應室,立即將玻塞蓋緊,並加水於小玻杯以防漏氣。夾緊螺旋夾,開始蒸餾。蒸氣通入反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內,蒸餾5min。
移動接受瓶,使冷凝管下端離開液麵,再蒸餾1min。然後用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶,以0.
05n硫酸或0.05n鹽酸標準溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。
同時吸取10.0ml試劑空白消化液按4.3操作。
4.4 計算
式中:x——樣品中蛋白質的含量,%;
v1——樣品消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
v2——試劑空白消耗硫酸或鹽酸標準液的體積,ml;
n——硫酸或鹽酸標準溶液的當量濃度;
0.014——1n硫酸或鹽酸標準溶液1ml相當於氮克數;
m——樣品的質量(體積),g(ml);
f——氮換算為蛋白質的係數。蛋白質中的氮含量一般為15~17.6%,按16%計算乘以6.
25即為蛋白質,乳製品為6.38,麵粉為5.70,玉米、高粱為6.
24,花生為5.46,米為5.95,大豆及其製品為5.
71,肉與肉製品為6.25,大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83,芝麻、向日葵為 5.
30。附加說明:
本標準由全國衛生標準技術委員會食品衛生標準分委員會提出,由衛生部食品衛生監督檢驗所歸口。
本標準由衛生部食品衛生監督檢驗所負責起草。
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