基因工程的方法是怎麼生產干擾素的

2021-05-20 17:59:22 字數 1310 閱讀 2156

1樓:冬月芳

已知干擾素基因則可直接化學合成法合成,也可通過pcr方法得到干擾素基因序列,在目的基因兩端加上粘性末端,連線到有相同粘性末端的原核生物表達質粒載體上(載體上含抗某一抗生素的基因),將質粒轉匯入感受態菌株,搖菌1小時後塗平板(平板中加入該抗生素,篩選成功匯入質粒的菌株),挑單克隆搖菌過夜,然後鑑定匯入的質粒是否成功表達干擾素。菌種可凍存於-80度。發酵罐大量培養後,取發酵液離心收集、純化干擾素。

用基因工程生產干擾素的具體過程 15

2樓:匿名使用者

1. 設計合成干擾素基因的兩端引物(完全的),每條引物內或5'-端最好有內切酶酶切位點。

2. 有藥物誘導細胞,如佛波酯,使細胞表達干擾素升高。

3. 破碎細胞,提取細胞總mrna.

4. 用逆轉錄試劑盒逆轉錄,把總mrna逆轉錄成cdna5. 以cdna為模板、干擾素引物為引物,pcr,得到完全的干擾素基因的pcr產物

6. 提取載體(質粒、病毒等),雙酶切,再把干擾素基因的pcr產物用相應的酶酶切,用連線酶連線

7.連線完成後分離純化,測序,與原干擾素序列比對。

8.鑑定序列無誤後(無義突變也行),匯入受體細胞,篩選9.篩選出來後,提取重組產生的干擾素,活性測定10.有活性再擴大規模培養,提取生產

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3樓:匿名使用者

培養菌種的單細胞,利用基因重組將質粒(質粒中有調控合成干擾素的基因)匯入受體細胞,然後初培養,再進行選擇行培養即可

1. 設計合成干擾素基因的兩端引物(完全的),每條引物內或5'-端最好有內切酶酶切位點。

2. 有藥物誘導細胞,如佛波酯,使細胞表達干擾素升高。

3. 破碎細胞,提取細胞總mrna.

4. 用逆轉錄試劑盒逆轉錄,把總mrna逆轉錄成cdna

5. 以cdna為模板、干擾素引物為引物,pcr,得到完全的干擾素基因的pcr產物

6. 提取載體(質粒、病毒等),雙酶切,再把干擾素基因的pcr產物用相應的酶酶切,用連線酶連線

7.連線完成後分離純化,測序,與原干擾素序列比對。

8.鑑定序列無誤後(無義突變也行),匯入受體細胞,篩選

9.篩選出來後,提取重組產生的干擾素,活性測定

10.有活性再擴大規模培養,提取生產

簡述基因工程假單胞菌生產干擾素的生產工藝過程及控制要點

4樓:

應該是這樣的大腸桿菌為原核生物,無高爾基體,所以干擾素不能以分泌物形式 而 酵母菌為真核生物,有高爾基體,所以干擾素能以分泌物形式

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