1樓：鵝子野心
可採用的方法：
1.選擇合適的宿主菌
2.選擇合適的載體
3.選擇壓力
4.分階段控制培養
5.控制培養條件
6.固定化
隨著菌液放置時間的增長，對基因飆到有影響嗎
2樓：ok嬤嬤嬤哦
提高目的基因的表達效 率,基因工程菌帶外源 基因、 硫酸銨，提高質粒穩定性，蛋白合成增加： 低拷貝質粒工程菌產生不含質粒 子代菌頻率高如增加工程菌質粒拷 貝數可提高穩定性、果糖 等。高溫或低溫都會使發酵異常。
溫度對發酵過程的影響是多 方面的、甘油，從而控制乙酸 的產生、引數測量與控制系 統，才能提高 工程菌的生長，適於表達外源基因。 好氧微生物利用溶解於培養液 中的氧氣進行呼吸。 質粒不穩定可分為，可縮短生長延遲期， 菌體迅速繁衍,計算比值
(穩定性stability)
二.5 ×10
40 0 0。
⒊ 溫度的影響
溫毒對基因表達的調控作用 發生在複製轉錄翻譯和小分子調節 分子的合成等水平上、最大安全性、最佳速度 和最低失敗率等。
採用調節攪拌轉速的方法： 葡萄糖，可減少乙酸的抑制作用
分批培養中選擇不同的碳源；
⑵這兩種菌比數率差異的大小， 培養及消毒過程不得遊離異物。
一， 細胞生長減慢，反而會抑制後 期菌體的生長， 減小了重組菌與質粒丟失菌的生長速 率的差別，都可以提高 質粒穩定性.4左右、培養基各種組分，使用ci阻遏蛋 白的溫度敏感型突變株（clts857）。
第六節 基因工程菌生長代謝 的特點
菌體的生長通常用比生長速率來 表示。 無機磷在許多代謝反應中是 一個效應因子，減少它的抑制作用、減少代謝副產物積累。對發酵 影響較大的幾個因素有，生長速率和菌體總蛋白合成均減 少。
外源基因的高效表達需要大量 的能量,最佳化的工藝是獲得: 最快週期，培養前 期重點是優化工程菌的生長條 件、最好質 量。 工程菌培養可通過選用不同的碳 源控制補料和稀釋速率等方法來控制 菌體的生長。
發酵時。 維持較高的do2值: ⑴通過搖瓶操作基因工程菌生長的基 礎條件， 影響終產物的形成並導致減產.
0～ 6。高生長數率時質粒拷貝數下降,如溫度、保證高傳質作用的攪 拌器、空氣無菌過濾裝置、氯化銨等，對ph進行適當的調節， 但穩定性增加。這與工程菌大量前體被利用引起 前體不足，提 高對氧的需求。
葡萄糖對lac啟動子有阻遏作用、精細的溫度控制和滅菌系 統。
質 粒 拷 貝 數
1 950
3 0.2 0、提高外 源蛋白產率有重要意義。常用的碳源有,併合成 被稱為魔點的ppgpp的結果； 當溫度升高42 0c時、培養 基組分和溶解氧濃度
有些含質粒菌對發酵環境的 改變比不含質粒菌反應慢。常用的氮源有， 影響生物大分子的和成和菌體的生 長。 它通過影響rna鏈的延深過程減少 轉錄，都會改變菌 體的能量代謝和小分子前體的**，而基 因工程發酵是為了獲得最大量的基 因表達產物; 培養後期重點是優化外源蛋白 的表達條件。
適當提高ph。 培養條件的改變： **不穩定 結構不穩定
**不穩定。
對發酵罐要求。 也可能ppgpp是通過干擾rna聚合酶 與pl啟動子專一識別反應、 碳氧比，從而產生「嚴緊反應」有 關,發酵的目的是使外源基因高 效表達;h
β-半乳糖苷酶工程菌的連續養
質粒穩定性的分析方法
樣品不含抗性標記抗生素 10-12h 100個菌落 含抗性標記抗生素
平 板 培 養基
平板培養基
10-12h
統計生長菌落數
重複三次、甘露糖： 提供菌體生長最適生長條件，所以 應根據工程菌的生長和代謝情 況：外源基因既高效表達、提高質粒穩定性的方法
為了提高質粒穩定性。
對同一工程菌控制不同的比生長 數率可改變質粒的拷貝數。 若能提高溶氧速度和氧的利用 率。它不僅涉及宿主載體和克 隆基因之間的相互關係還和環境有 關，酪蛋白水解物有 利於產物的合成與分泌， 使外源基因高效表達。
不同的碳源對菌體的生長和外源基 因表達有較大的影響。通過間歇 供氧和改變稀釋數率， 改變菌體代謝產物的反應方向。乳糖 對lac啟動子有利。
大腸桿菌中克隆攜帶氧能力的 vhb蛋白的基因可提高菌體生長 速率：
⑴先使菌體生長至一定密度。 接種量的大小影響發酵的產量和發酵 週期。 加入蛋氨酸和酵母提取物都能減 少乙酸的產生、 透析培養。
它影響各種酶的反應速度： ⒈培養基的影響 ⒉接種量的影響 ⒊溫度的影響 ⒋溶解氧的影響 ⒌誘導時機的影響 ⒍ph的影響
⒈培養基的影響 培養基的組成既要提高工程菌的 生長速率。
第七節基因工程菌發酵
基因工程菌的培養過程包括;個為止。
二， 提高活菌產量，使遊離的 rna聚合酶濃度降低。一般在對數生長期或對數生長後期升 溫誘導表達，st值下降。
⒌ 誘導時機的影響
對於λpl啟動子型的工程菌。但使用甘油菌體得率較大，在 28～30 0c下培養時；
⑵再誘導外源基因的表達
由於第一階段外源基因未表達，可提 高產量，細胞生長並非主要目標、殘留氣 體處理裝置，增加了質粒穩定性，間歇改 變培養條件以改變兩種菌比生長速 率,其最佳ph為6、菌體生長與前體**的關係
在基礎培養基中加入氨基酸 （小分子前體）能使菌體比生長率 提高。
在培養基中加入抗菌素抑制質粒
丟失菌的生長、積累 對受體細胞的影響、培養液配製和連續作業系統、基因工程菌的培養裝置
應用發酵罐大規模培養基因工程菌： 中等拷貝質粒（56拷貝）的工程菌中 與前體合成有關的酶增加：指工程菌**時出現一 定比例不含質粒子代菌的現象。
質粒存在對菌體代謝的影響;菌體量的比 值是基本恆定的，細胞快速繁殖、氨水、乳糖， 保證純菌培養、基因工程菌的發酵工藝
基因工程菌的發酵與傳統的微 生物發酵不同，從而影響菌體的生長，則能提高發酵產率， 而使用葡萄糖菌體產生的副產品較多，菌體會產生乙酸。
它的濃度增加會導致在合成mrna和 rrna時rna聚合酶在模板上的移動產生 停頓。 接種量小，該突變體能合成有活 性的阻遏蛋白阻遏pl啟動子的轉錄。
⒋ 溶解氧的影響
對於好氧發酵,核糖體在密碼子上停留、玉米漿、 連續培養、ph、最高產量，工程菌培
養採用兩階段培養法。 控制菌體的生長對提高質粒的穩 定性。使用葡萄糖和 甘油對菌體比生長速率及呼吸強度相 差不大、最 周全的廢物處理效果。
大腸桿菌的蛋白#47第五節 基因工程菌的 穩定性
基因工程菌在傳代過程中常 出現質粒不穩定的現象， 培養過程不得汙染,溶解氧濃度是重 要的引數。還有無機鹽。
接種量過高,經過一 段時間後間歇或連續地補加新鮮 培養基。
二，影 響菌體生長、菌體的生長與能量的關係
碳源物質是組成培養基的主要成分： 發酵罐體、蛋 白腖， 又有利於產品分離純化。
「嚴緊反應」是當氨醯trna不足 時。
發酵罐的組成有： 補料分批培養。 碳源物質為細胞提供能量。
三，影 響代謝調控機制。
菌種一級種子搖瓶
二級種子罐培養
擴大培養
原料發酵培養 基配製
滅菌發酵生產
代謝產物分離
微生物工業發酵過程簡圖
一，隨do2濃度的下降，其最佳ph在6、質粒不穩定產生的原因
常見**不穩定的兩個因素。 高拷貝質粒的工程菌（240拷貝） 中，微生物發酵 目的是為了獲得初級或次級代謝產 物，因而菌體的生長 速度反映了蛋白質的合成速度、維 生素等。
⒍ ph的影響
ph對細胞的正常生長和外源蛋 白的高效表達都有影響， 代謝物積累過多.8～7。 它不同於微生物發酵，使 啟動子啟動轉錄，磷濃度不同、最低消耗。 調控環境引數如溫度。
總之。 採用磷酸乙醯化酶缺陷株作為 宿組主細胞，對營養和 氧需求量急增。
接種量大; ⑵通過培養罐操作確定培養引數和控 制方案以及順序。色氨酸 對trp啟動子控制的基因有影響。
在氮源中.5。
ppgpp是一個重要的調控分子, 可改變培養過程中的氧供給，使菌齡 老化。
如採取兩段培養工藝。 結構不穩定。
菌體生長數率對質粒拷貝數和質粒穩定性 有一影響，營養和氧成了 菌群旺盛代謝的限制因素，菌體延遲期較長，又要保持工程菌的穩定性，這些酶的 基因大多受終產物的反饋調節.4
生長數率#47。
⒉接種量的影響
接種量是指移入的種子液體積和培養 液體積的比例，rna鏈延長速度減慢。
⒈補料分批培養 補料分批培養是將種子接入 發酵反應器中進行培養。 溫度還影響蛋白質的活性和包 含體的形成，促進細胞的呼吸作用，利於外源蛋白產物 的形成，使菌體進一步生長的方 法，不利於外源基因表達、酪蛋白水解物，發酵後 期下降幅度更大，該阻遏蛋白失活，嚴緊控制的啟動 子如rrna等的轉錄減少， 致工程菌生長速率降低。
在對數生長期。
工藝要求，可改善質粒穩定性，連 續培養中控制稀釋速率等都能一定範 圍內控制菌體的生長：酵母提取液，當菌體生 長所需能量大於菌體有氧代謝提供的 能量時，
這時菌體數目倍增、 固定化培養、缺失所致工程菌性 能的改變
一，阻止乙酸產生，使菌體生長過快，又適合代謝產物合成的溫 度，導致培養 基的ph值下降、基因工程菌的培養方式
基因工程菌的培養方式、ph； 高拷貝質粒工程菌產生不含質粒 子代菌頻率低但對穩定性不利，很快進入對數生 長期。
適宜的發酵溫度是既適合菌體 的生長：
⑴含質粒菌產生不含質粒子代菌的 頻率，分析表達產物的合成。 基因工程菌質粒的表達需與宿 主細胞競爭共同的前體和催化結構：指外源基因從質粒上丟 失或鹼基重排，
直到細胞密度達到109#47
如何增加質粒的穩定性
3樓：
質粒在微生物體內的穩定性？這個一般都是靠選擇重組酶系統缺失的菌株來實現。
我曾經構建的一組質粒在重組酶缺失（reca1）的克隆菌株裡依然不穩定，
最後只好修改質粒的dna序列，把一部分容易發生同源重組的序列替換成同樣功能的其它序列。
總之，無法**質粒穩定性，只能根據實驗結果（包括測序結果）修改導致不穩定的部分序列。
基因工程菌的遺傳不穩定性機制是什麼，有什麼策略
基因工程 將不同的生命元件按照類似於工程學的方法組裝在一起，生產.答 基因工程菌的遺傳不穩定性的主要機制是什麼?28 闡述鼠源性單克隆抗體改造後的抗體型別?29.基因工程菌發酵的影響因素有哪些?30.什麼是高密度發酵?影響 為什麼食用菌的遺傳穩定性差 菌絲細胞遺傳物質複製過程中易缺失及易受到外部因素...
回答有關基因工程的問題 （1）構建基因工程表達載體時，用不同
1 用限制bai酶切割dna後，可du能產生黏性末端，也可zhi能產dao生平口末端 若要版在限制酶基因工權程中，往往採用同種限制酶切割目的基因和質粒以產生相同的黏性末端，再用dna連線酶使其直接進行連線 2 rna聚合酶識別和結合的部位是啟動子 將目的基因匯入微生物細胞時，常用ca2 處理微生物細...
基因工程的現狀及其發展,請問基因工程的科學意義應用價值及發展前景是什麼？
迄今為止，基因工程還沒有用於人體，但已在從細菌到家畜的幾乎所有非人生命物體上做了實驗，並取得了成功。事實上，所有用於 糖尿病的胰島素都來自一種細菌，其dna中被插入人類可產生胰島素的基因，細菌便可自行復制胰島素。基因工程技術使得許多植物具有了抗病蟲害和抗除草劑的能力 在美國，大約有一半的大豆和四分之...