1樓:
1全部1.初步提純 (差速離心): 將上述組織勻漿液於4°c 3500g 離心15min,
取上清液,以緩衝液ten 重懸沉澱物,反覆離心2-3 次。棄沉澱,合併上清液,加入蔗糖配製成終濃度為25%(w/w)的蔗糖墊,於4°c 45000g 離心1.5h。
棄上清,以25%(w/w)蔗糖/ten 重懸沉澱物。
2.分散病毒粒子:分散在4°c 冰箱中用磁力攪拌重懸物過夜,使重懸液分散均勻。
3 .進一步提純(蔗糖密度梯度離心):以ten 配製蔗糖梯度(30%、35%、
40%、45%、50%、55%,w/w),加鋪上述重懸液於離心管管頂。於4°c 125000g 離心4h,收取蔗糖梯度中乳白色或淺褐色沉澱帶,(如沉澱可加大密度梯度範圍)吸取帶附近糖液測糖密度。
4.病毒**:以te(0.
05m tris-hcl,0.01m edta , ph 7.8)稀釋。
於4°c 45000g 離心1.5h 去除蔗糖,以te 重懸沉澱物,-70°c 儲存備用。電鏡觀察純度和形態。
5.根據結果調整離心步驟的細節。
2樓:匿名使用者
首先你要知道大概是什麼病毒,然後要找一個合適的受體細胞,加入病料提取物(如血清),隨機培養四到五代,發現細胞有病理變化後提取dna,用病毒特異引物pcr擴增,如能擴增出來,證明是目的病毒。
怎樣從動物病料中將病毒的dna提取出來
3樓:匿名使用者
提取dna的方法,請參考
該方案採用離心操作,適合於從動物組織樣品中快速提取病毒基因組dna。以下步驟都在室溫下進行。
1. 取50-100mg的動物組織加入約3倍體積的生理鹽水進行勻漿,充分勻漿後10,000rpm離心2min去除殘餘組織。
2. 取150 μl上清液至新的潔淨離心管中。
3. 加入500 μl dna提取液至上清液中,顛倒混勻,室溫靜置5-10min裂解病毒。
4. 把dna吸附柱裝在2ml收集管中,把裂解後的液體全部轉移至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。
5. 倒棄濾液,把dna吸附柱裝**集管中,加入400 μl洗滌液至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。
注:洗滌液初次使用前請先加入48 ml無水乙醇。使用完立即蓋上蓋,以防乙醇揮發。
6. 重複步驟5。
7. 倒棄收集管中的濾液,把dna吸附柱裝**集管中,10,000 rpm離心3 min。
8. 把dna吸附柱裝在新的潔淨離心管中,加入30-50 μl洗脫液至吸附柱**,靜置1-2min,10,000 rpm離心1min,所得即為dna溶液,可用於後續實驗,若暫時不用,應於-20 ℃可儲存。
4樓:風雨戰神
需要活體動物的活體組織。對活體細胞進行組織培養,可以在培養基中獲得裂解細胞而釋放出來的病毒,對病毒液進行離心即可。
求助,從動物組織中提取病毒dna,為什
5樓:艾康生物
您好!就是破碎 分離 提取 。病毒的話就是提取 純化然後再取樣做dna。
如何從病料中提取細菌的dna 5
6樓:儒雅的酒酒酒發
以下是從動物病毒中快速提取dna的方法,請參考
該方案採用離心操作,適合於從動物組織樣品中快速提取病毒基因組dna。以下步驟都在室溫下進行。
1. 取50-100mg的動物組織加入約3倍體積的生理鹽水進行勻漿,充分勻漿後10,000rpm離心2min去除殘餘組織。
2. 取150 μl上清液至新的潔淨離心管中。
3. 加入500 μl dna提取液至上清液中,顛倒混勻,室溫靜置5-10min裂解病毒。
4. 把dna吸附柱裝在2ml收集管中,把裂解後的液體全部轉移至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。
5. 倒棄濾液,把dna吸附柱裝**集管中,加入400 μl洗滌液至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。
注:洗滌液初次使用前請先加入48 ml無水乙醇。使用完立即蓋上蓋,以防乙醇揮發。
6. 重複步驟5。
7. 倒棄收集管中的濾液,把dna吸附柱裝**集管中,10,000 rpm離心3 min。
8. 把dna吸附柱裝在新的潔淨離心管中,加入30-50 μl洗脫液至吸附柱**,靜置1-2min,10,000 rpm離心1min,所得即為dna溶液,可用於後續實驗,若暫時不用,應於-20 ℃可儲存。
如何從採集的病料中提取病毒
7樓:匿名使用者
如果真要針對這兩個條件來選的話,先抽好氧的再抽厭氧的,因為這兩個過程只有血液輸送管道中的空氣會對結構造成影響,但這個影響非常小,比操作過程中的影響還要小得多,因此先抽哪個對檢測結果影響都不會很大,主要是培養的條件和待測樣本的儲存條件影響會大一點。
病毒體內dna的提取方法和原理是什麼
8樓:匿名使用者
就是破碎 分離 提取 病毒的話就是提取 純化然後再取樣做dna。
病毒dna提取技巧?
9樓:匿名使用者
磁珠法和離心柱法對病毒dna提取各有利弊,對於珍貴樣本用biog病毒dna提取方法獲取的dna純度比較有優勢,對於後續分子檢測還是比較合適的,磁珠法適合大批量樣本的處理,可以直接上儀器做。
10樓:
以下是從動物病毒中快速提取dna的方法,請參考該方案採用離心操作,適合於從動物組織樣品中快速提取病毒基因組dna。以下步驟都在室溫下進行。 1. 取50-100mg的動物組織加入約3倍體積的生理鹽水進行勻漿,充分勻漿後10,000rpm離心2min去除殘餘組織。
2. 取150 μl上清液至新的潔淨離心管中。 3. 加入500 μl dna提取液至上清液中,顛倒混勻,室溫靜置5-10min裂解病毒。 4. 把dna吸附柱裝在2ml收集管中,把裂解後的液體全部轉移至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。
5. 倒棄濾液,把dna吸附柱裝**集管中,加入400 μl洗滌液至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。注:洗滌液初次使用前請先加入48 ml無水乙醇。
使用完立即蓋上蓋,以防乙醇揮發。 6. 重複步驟5。 7. 倒棄收集管中的濾液,把dna吸附柱裝**集管中,10,000 rpm離心3 min。
8. 把dna吸附柱裝在新的潔淨離心管中,加入30-50 μl洗脫液至吸附柱**,靜置1-2min,10,000 rpm離心1min,所得即為dna溶液,可用於後續實驗,若暫時不用,應於-20 ℃可儲存。
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