1樓:
條帶變黃這個現象沒有碰到過,什麼叫底部條帶變成黃色,其它條帶呢?有正常的麼?染色分快染和慢染,快染做法是先用染色液進行染色1h左右,如果嫌麻煩就在微波爐里加熱30s,再染30分鐘左右的樣子就可以了,然後進行脫色,1小時內更換三次脫色液,基本就可以清楚的看到條帶了。
慢染是先用脫色液進行15脫色,再在脫色液中加入少量染色液,可以染色過液,這樣做的好處是非常省脫色液。之前什麼固色這些過程我沒采用過,所以沒有進行過對比。不過一般染色應該用r250,g250一般用做蛋白質的定量分析。
這裡介紹了g250和r250的區別。試劑和染料時間久一點沒什麼關係,緩衝液1-2星期重新配製一次,否則tris緩衝液ph值容易變化,會對跑膠結果有影響,具體還有什麼問題可以再討論,因為你給的資訊比較少不好做分析。
2樓:玫瑰_薄荷
貌似固定液時間太短了,一般2h以上
變黃的話可能是蛋白自身有一定的問題,也有可能是配膠時有誤(但概率不大)
脫色時1天要換脫色液2-3次的
緩衝液之類的最好還是現配現用,而且試劑要冷藏。染料應該沒多大關係的。
3樓:
怎麼可能染一夜色,時間太長了。你上網再查查染色的時間吧。
變黃不知為什麼,沒遇到過,但既然底部有條帶,膠體和跑帶應該沒問題吧
westernblot電泳後,為什麼要考馬斯亮藍染色,直接轉膜不行嗎?謝謝!
4樓:匿名使用者
wb的膠用考馬斯亮藍染色,有為了確定你的目的條帶電泳情況目的,還有一個目的,就是跟用麗春紅染摸一樣的作用,看轉膜的效率。也就是看你的目的條帶是否都轉移到你的膜上了。
這步染色完全可以省略,一般都可以用預染marker來進行轉膜觀察,另外考馬斯亮藍與蛋白結合後,很難再去除。
5樓:匡雅霜
可以啊。
一般只是用考馬斯亮藍進行預染,提前看一下粗略的結果,不然等westernblot的結果出來基本要第二天了。所以不染色直接轉膜沒問題。
sds-page電泳遇到的問題。
6樓:匿名使用者
3個方面,電泳儀、緩衝液、膠
電泳儀你可以換一臺好的試一下,如果跑出來還這樣,下一步,如果好了,那麼要麼你設定出了問題,電壓電流什麼的,要麼儀器壞了。。
緩衝液注意ph 以及sds的量,可以換一瓶試一下,比如別人配的...如果還是有問題下一步,如果好了,那麼...呵呵,話說你可以blame天平~~
膠如果配稀了或者沒凝好也可能是彌散的...換塊膠吧....
最後說一下 條帶越跑越寬是必然的,條帶最後終歸會有部分彌散,就看你需要跑多少大小的蛋白,一般120v恆壓65min10%或8%的膠30kda以上都不會太彌散,如果你確實需要分離小蛋白,請使用glycine-sds-page,protocol自己上ncbi搜~~望實驗順利~~
7樓:匿名使用者
有三方面原因:電泳儀、緩衝液、膠
1.電泳儀你可以換一臺好的試一下,如果跑出來還這樣,下一步,如果好了,那麼要麼你設定出了問題,電壓電流什麼的,要麼儀器壞了。。
2.緩衝液注意ph 以及sds的量,可以換一瓶試一下,比如別人配的...如果還是有問題下一步,如果好了,那麼...呵呵,話說你可以blame天平~~
3.膠如果配稀了或者沒凝好也可能是彌散的...換塊膠吧....
8樓:匿名使用者
試一下將開始電壓設較低的值;
配好的分離膠,老化時間加長一些,避免不均勻。。
SD敢達選機問題。SD敢達機體選擇問題!
喜歡拳頭機的話選異端紅,1號 最後一刀倒地前接3號的菊一文字,選狙擊怕死的話用陸戰型,出鐵壁後還算耐打,想選對團隊有輔助的狙擊就用吉母狙擊特裝型cu,2號技能是雷達。那個 怎麼說呢 其實你的機體看起來都不怎麼強力 實話 在這個s機體,a機體暴力橫飛的年代 他們並不是多麼出色 容易被壓制。但是我不是說...
夢幻染色問題
其實黃色 就沒必要 在2染了 黃頭髮黃飄帶黃衣服 就夠了 不過本人不喜歡 如果你準備2染 不妨 把你這身黃衣服 在染坊那裡儲存了形象 然後 染綠衣服 花豆 綠頭髮 果子 或者 藍衣服 藍飄帶 豆子 藍頭髮 果子 如果3染 就 白衣服 白飄帶 頭髮我不推薦染 黑色的頭髮和什麼搭配都很好看 咱們都是黑頭...
SD敢達劍Z加點,SD敢達 劍Z加點問題
泥嚎 現在gf的jz一般都是用來單挑123 常見的加點是全攻 如果你覺得手感不夠可以加3點機動 拉六圍根本沒意義的說 加攻對123號 的加成都不錯 加點是個人喜好 不用那麼糾結的哦!建議加點推進,然後因為是a拳的關係,多加些防對死亡的幫助會很大.最後再剩餘的點數加點攻擊就夠了.sd敢達 劍z加點問題...