影響PCR反應效率的因素有哪些?如何有效地提高PCR反應的效率

2021-04-20 16:50:35 字數 1427 閱讀 8705

1樓:g年輪

模板純來度,有較多蛋白或其自他雜質時,會一bai定程度影響pcr效率;

模板量du,過高zhi的模板量反而會降低pcr效率和特異性;

引物,引物的長度需要再效率和特異性間獲得優化,其次要控制引物gc含量;

聚合酶,要考慮酶的保真率和速度;

mg離子濃度,mg離子濃度過高會降低特異性,濃度過低會降低效dao率;

退火溫度:退火溫度低,效率會高,但特異性降低;退火溫度高,效率降低,但特異性會提高;需優化.

影響pcr反應效率的因素有哪些?如何有效地提高pcr反應的效率

2樓:奕從霜奉專

模板純度,有較多蛋白或其他雜質時,會一定程度影響pcr效率;

模板量,過高的模板量反而會降低版pcr效率和特權異性;

引物,引物的長度需要再效率和特異性間獲得優化,其次要控制引物gc含量;

聚合酶,要考慮酶的保真率和速度;

mg離子濃度,mg離子濃度過高會降低特異性,濃度過低會降低效率;

退火溫度:退火溫度低,效率會高,但特異性降低;退火溫度高,效率降低,但特異性會提高;需優化.

3樓:閭浩壤秦以

引物的設復計:

引物的設計不好

制可能產生非特bai異,造成假陽性。du

聚合酶:酶zhi

是影響pcr的關鍵dao

,酶的失活造成pcr的失敗,不同的酶擴增的片段也有差異。

其次就是pcr反應體系,不現成份的嘗試對pcr也造成影響。例如mg2+,

dntp,

影響pcr反應效率的因素有哪些?如何有效地提高pcr反應的效率?

4樓:閉曄旅爾容

一、溫度迴圈引數

二、引物引物設計

三、dna聚合酶

四、mg2+

影響pcr擴增效率的因素有哪些

5樓:匿名使用者

主要考bai慮是否在模板稀釋過程中出現問du題,是否存在zhi高濃度樣品汙染低濃

dao度樣品的情況。具回體的要看了你的擴增

答曲線、溶解曲線以及標準曲線的結果才能判斷。其次題主提到的兩個問題1、模板濃度過高會抑制pcr反應,可能會導致擴增效率降低。但同時可能會出現非特異性擴增導致結果的ct值不可信,最終導致擴增效率不可信。

2、在一定範圍內提高退火溫度不會太影響擴增效率。

如何有效的提高pcr反應的效率

6樓:匿名使用者

1,科學設計引物,注意末端匹配度,無不必要互補,cg含量,酶切位點等。

2,增加迴圈數

3,提純模板

4,用好的taq酶

5,降低退火溫度(可能降低特異性)

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