流式染色後為什麼有些需要離心去掉熒光抗體,有些直接就可以上機

2021-05-24 18:38:49 字數 2385 閱讀 6689

1樓:

我覺得你是想用熒游標記的抗ngf/cox-2抗體來做直接染色,這樣的話可以在流式上試試。但是一般回免疫熒光是

答用間接法,這樣的話熒光抗體只anti某個種屬的抗體(視一抗而定),不是anti ngf或cox-2的,這樣就不能用於流式了。

如果一個抗體可以用來「做western blot,免疫熒光,免疫共沉澱,elisa」,我估計著是hrp或鹼性磷酸酶或生物素之類標記的,然後需要再加熒游標記的二抗,這類抗體也是不能做流式用的。

我只用過流式的抗體來做免疫熒光(直接染色),效果還不錯,但是反過來就沒試過。

關於免疫染色的問題,為什麼要用一抗二抗?直接把熒光基團連到一抗上不就行了嗎?

2樓:歐陽俠

直接把熒光基團連線在一抗上確實是可以的,但是難就難在抗體與熒光基團的連線,每換一種抗體,就需要重新連線一次,這不僅麻煩,成本也就高了。

而抗體的fc段是不變的,也就是一抗的fc段不變,那麼只需要連線針對一抗fc段的二抗就足夠應付任何情況了,這樣就容易得多。

3樓:匿名使用者

補充,標記在二抗上面還會有一個熒光的放大效應

可否用流式抗體來做免疫熒光用

4樓:南京金益柏生物科技****

我覺得你是想用熒游標記的抗ngf/cox-2抗體來做直接染色,這樣的話可以在流式上試試。但是一般免疫熒光是用間接法,這樣的話熒光抗體只anti某個種屬的抗體(視一抗而定),不是anti ngf或cox-2的,這樣就不能用於流式了。

如果一個抗體可以用來「做western blot,免疫熒光,免疫共沉澱,elisa」,我估計著是hrp或鹼性磷酸酶或生物素之類標記的,然後需要再加熒游標記的二抗,這類抗體也是不能做流式用的。

我只用過流式的抗體來做免疫熒光(直接染色),效果還不錯,但是反過來就沒試過。

流式細胞空白對照 陰性對照 陽性對照分別加什麼東西,各自用來做什麼

5樓:匿名使用者

流式細胞儀檢測的是相對值,所以必須要有各種對照來設定機器的引數和閾值。這個清單比較長。就你說的這三種,我可以說一下。

一般用熒游標記的抗體染色後,樣本有可能會出現兩個細胞群,一個陽性,一個陰性的,這樣的很好判斷。另外一種情況,就是整個細胞群的訊號在染色後發生了漂移,但是看不出陽性和陰性的分界。這時候,對照的作用就體現出來了。

所謂空白對照,就是沒有用熒光抗體染色的樣本,上機檢測後,也會得到訊號。這時候要調節pmt(也就是檢測器)的電壓,這樣對訊號的擴增就會發生變化。這個酶染色的樣本,就把訊號置於最低的位置。

如果是對數比例的訊號軸,一般是置於10的3次方以下的位置。

而陰性對照,就是已知沒有可被抗體識別靶分子的樣本。用熒光抗體染色後,訊號應該和空白對照相似。如果有很大的不同,說明抗體的非特異性結合很高,或者染色的步驟有問題。

而陽性對照,就是用已知肯定會有被抗體識別的靶分子的樣本。用熒光抗體染色後,應該會出現較強的訊號。這個樣本有兩個作用,一是出現強訊號後,可以適當調節pmt的電壓,讓訊號都位於可檢測範圍之內。

另外,如果沒有出現預期的訊號,那可能是抗體失效,或者染色方法有問題。那檢測的其他樣本的結果也就無效了。

流式pd-1抗體做免疫熒光的非特異性強為什麼

6樓:匿名使用者

免疫熒光來

是直接染色自還是間接法?我覺得你是想用熒游標記的抗ngf/cox-2抗體來做直接染色,這樣的話可以在流式上試試。但是一般免疫熒光是用間接法,這樣的話熒光抗體只anti某個種屬的抗體(視一抗而定),不是anti ngf或cox-2的,這樣就不能用於流式了。

如果一個抗體可以用來「做western blot,免疫熒光,免疫共沉澱,elisa」,我估計著是hrp或鹼性磷酸酶或生物素之類標記的,然後需要再加熒游標記的二抗,這類抗體也是不能做流式用的。

我只用過流式的抗體來做免疫熒光(直接染色),效果還不錯,但是反過來就沒試過。

樓上兩位還是要仔細看下產品說明書

做免疫熒光的抗體能用來做流式嗎

7樓:南京金益柏生物科技****

免疫熒光是直接染色還是間接法?我覺得你是想用熒游標記的抗ngf/cox-2抗體來做直接染色,這樣的話可以在流式上試試。但是一般免疫熒光是用間接法,這樣的話熒光抗體只anti某個種屬的抗體(視一抗而定),不是anti ngf或cox-2的,這樣就不能用於流式了。

如果一個抗體可以用來「做western blot,免疫熒光,免疫共沉澱,elisa」,我估計著是hrp或鹼性磷酸酶或生物素之類標記的,然後需要再加熒游標記的二抗,這類抗體也是不能做流式用的。

我只用過流式的抗體來做免疫熒光(直接染色),效果還不錯,但是反過來就沒試過。

樓上兩位還是要仔細看下產品說明書

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