我想問一下熒光定量PCR法用2Ct計算相對定量時結果的

2021-05-29 15:23:01 字數 4215 閱讀 4605

1樓:匿名使用者

這個很簡單啊。你做了一次實驗,得到的樣本做了一次pcr,得到了一次的相對定量(設對照組為1)。然後重新做實驗,再做pcr,又得到一組,這樣至少重複3次,就有3組相對定量了。計算標準差

對照組的標準差:取對照組的平均ct值設為1, 3次試驗的ct值根據2-△△ct計算相對量,可以算出對照組的標準差。

熒光定量pcr方法的特異性和準確度怎麼計算

2樓:南京金益柏生物科技****

特異性主要看檢測的目的樣品是否是專一的,準確度主要看測量資料之間的偏差

qpcr中的相對定量和絕對定量的區別

3樓:奔馬的香香豬

絕對定量是用已知濃度的標準品繪製標準曲線來推算未知樣品的量,絕對定量不同於相對定量,我們是驗室用biog kit做pcr實驗檢測目標rna,做下來ct值在28左右,s型曲線比較典型

4樓:匿名使用者

熒光絕對定來量中標準品:指

自用含有目的基因bai的質粒,知道質du粒的分子量和zhi濃度計算出拷貝數,然後dao倍比稀釋就作為絕對定量的標準品。

獲取:把目的基因p出來,然後接到質粒上,轉染搖菌擴增,然後再抽質粒,酶切純化。

最後把純化的目的基因做個鑑定。

做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼

5樓:北京索萊寶科技****

△△ct = △ct(試驗樣品) — △ct(基準樣品)△ct(試驗樣品) = ct(試驗樣品,目的基因) — ct(試驗樣品,內參基因)

△ct(基準樣品) = ct(基準樣品,目的基因) — ct(基準樣品,內參基因)

2 -△△ct =2 -(-1.2)= 2.30

我想問一下熒光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量的問題

6樓:

做了一個實驗,內部參考電壓可以得到幾個ct值,會得到多個目標基因。在這種情況下,根據ct值的平均值,將得到的比率(相對量)。

實驗肯定不是唯一的一次,至少重複3次。這將是一個倍數的3個或更多,得到。 3個以上的值,你可以計算平均值和標準偏差的。

7樓:塔渟盛淑賢

你一次實驗做的資料,內參可以得到幾個ct值,目的基因也會得到幾個。這樣的話,根據平均的ct值,就會得到一個倍數(相對量)。

實驗肯定不會只做一次吧,至少重複3次以上。這樣就會得到3個以上的倍數了。3個以上的數值就可以算均數和標準差了。

您好,我想問一下實時熒光定量pcr的資料分析!

8樓:傻蛋嘟嘟

用2-△△ ct法算的話,應如何算?

假設檢測a基因,ct分別為(這裡記住ct越大,表明相對含量越低)普通組/test1:28

實驗組1/test2:29

實驗組2/test3:30

這時候要設對照了,假設test1為對照組(普通組),當然是以普通組為對照

那麼,相對含量為:

普通組/test1:1

實驗組1/test2:2^-(28-29)=1/2=0.5實驗組2/test3:

2^-(28-30)=1/4=0.25a基因在實驗組1和實驗組2中的表達量,分別下降2倍和4倍!

所以,就出來啦,結果

對於每組不同部位的比較的話,將其中一個處理為1進行比較嗎?

如實驗組1

testis

brain

liver

muscle

可以把任何一個作為1,作為對照,但是要在figure 的legend中註明出來,說清楚就好了!

那對於三個組中的同一部位的比較的話,難道也要將其中一組處理為1嗎?

是的,可以,如

brain

普通組/test1

實驗組1/test2

實驗組2/test3

就以普通組/test1,為對照組,設為1,其他為相對含量,也要在figure 的legend中註明出來說清楚!

9樓:匿名使用者

這個很簡單。你把普通組的某個部位的相對量設為1。其他的,不管是組內的,還是組間的,都用△△ct的方法算出相對量。

再進行比較。基本概念就是設一個點為基點,其他的都是相對值。不要每比一次都設一個1。

請問:做熒光定量pcr時,△△ct值是什麼意思,它的計算公式是什麼? 20

10樓:禾鳥

△△ct是熒光定量計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。

ct=-1/lg(1+ex)*lgx₀+lgn/lg(1+ex),其中,n為擴增反應的迴圈次數,x₀為初始模板量,ex為擴增效率,n為熒光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct(目的基因)-ct(內參基因);△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。

起始拷貝數越多,ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線,其中橫座標代表起始拷貝數的對數,縱座標代ct值。因此,只要獲得未知樣品的ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

擴充套件資料

熒光定量pcr的原理:

熒光定量pcr技術:在pcr反應體系中加入熒光基團,通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程,然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中,對全程pcr擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。

實時熒光定量常用的熒光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。

ct值:c代表cycle,t代表threshold,ct值的含義是每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。

11樓:一生一個乖雨飛

△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。

ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度

斜率=-1/lg(1+e)

擴增效率e=1, 斜率=-3.32

擴增效率範圍:90%-110%

斜率範圍:-3.1和-3.59之間

例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方。

當然這計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時使用沒什麼問題,如果兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。

12樓:匿名使用者

ct= -k lgx0+ b(線性方程)用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度

斜率=-1/lg(1+e)

擴增效率e=1, 斜率=-3.32

擴增效率範圍:90%-110%

斜率範圍:-3.1和-3.59之間

△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式,用於比較不同樣品之間的差別或變化比率

例如,想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別,選取18s作為內參基因,就用a基因的ct值減去18s的ct值,得到△ct1,用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2,然後用△ct1-△ct2=△△ct,而a,b基因的表達量差別為2(-δδct)次方,當然這中計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的,平時隨便用用沒什麼問題,如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣,這個計算方法是不能用的。

13樓:匿名使用者

我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式,方便的話可以給我留一下你的郵箱

關於實時熒光pcr檢測2-△△ct計算結果?

14樓:塗含秀扶紹

這個很簡單啊。你做了一次實驗,得到的樣本做了一次pcr,得到了一次的相對定量(設對照組為1)。然後重新做實驗,再做pcr,又得到一組,這樣至少重複3次,就有3組相對定量了。計算標準差

對照組的標準差:取對照組的平均ct值設為1,

3次試驗的ct值根據2-△△ct計算相對量,可以算出對照組的標準差。

定量pcr測兩個受體可以算比例嗎?

15樓:匿名使用者

pcr 測受體太不靠譜,mrna的量和蛋白量不是線性關係,尤其是受體。

如果要測量細胞表面2個受體的比率,最好用流式細胞儀來測量

幫忙看一下乙肝病毒DNA熒光定量PCR檢測報告單

hbv dna的檢測有好幾種方法,目前常用的方法檢測參考值為e 03,低於這個參考值就是陰性。根據你的說法,應該考慮是陽性,但病毒滴度不高,可密切觀察病情。同時不知道你的乙肝六項和肝功能檢測結果如何?你好。從你的病毒量來看是乙肝小三陽。但病毒量不是很高。是陽性。如果你條件允許的話可以採取積極 乙肝病...

我想問一下,我想問一下,大家?

意外流產以後也應該進行清宮,你的情況就是清宮不徹底造成的,請儘快去醫院處理一下,而且,小產應該休假,國家有明文規定的,保護婦女的身體健康很重要的.祝早日 二十天應該是正常的,不要超過一個月就應該對了。去醫院看看吧 傷身體的 我想問一下,大家?那叫什麼呢?說明一下你的問題,好給你解答,提問的時候一定要...

你好,我想問一下,你好,我想問一下?

你好,我想問一下你問什麼呢?什麼樣的問題,說的不清楚,把問題擺出來,大家才能夠幫到你。你好,我想問一下?你好,你想問一下什麼呢?你問我什麼,我就給你回答什麼。我們是友好的。你可以看看你定的時候的退訂條款,是否可以提前退房,當然是房間設施的問題,你找前臺給你調整下應該是可以的 應該是可以退房的,這個因...