1樓:匿名使用者
詳細bai的du抗微生
zhi物藥
dao敏試回驗
答
如何做藥敏試驗
2樓:匿名使用者
用藥敏實驗進行藥物敏感度的測定,以便準確有效的利用藥物進行**。但由於藥敏試驗要求比較嚴格,條件比較高,僅僅在大中專院校或科研單位有條件的可以操作,一些養殖廠或一些門診難有條件進行藥敏試驗的操作。針對這個問題,農業部動物檢疫所青島易邦生物工程****動物疫病診療中心經過幾年的總結和實踐,逐漸總結出幾套適合基層進行藥敏試驗的操作方法。
目前,臨床微生物實驗室進行藥敏試驗的方法主要有紙片擴散法,稀釋法(包括瓊脂和肉湯稀釋法),抗生素濃度梯度法(e-test法),和自動化儀器等。
紙片擴散法
該法是將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上,紙片中的藥物在瓊脂中擴散,隨著擴散距離的增加,抗菌藥物的濃度呈對數減少,從而在紙片的周圍形成濃度梯度。同時,紙片周圍抑菌濃度範圍內的菌株不能生長,而抑菌範圍外的菌株則可以生長,從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈,不同的抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂中擴散速度的影響而可能不同,抑菌圈的大小可以反映測試菌對藥物的敏感程度,並與該藥物對測試菌的mic呈負相關。
稀釋法稀釋法藥敏試驗可用於定量測試抗菌藥物對某一細菌的體外活性,分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。實驗時,抗菌藥物的濃度通常經過倍比(lg2)稀釋,能抑制待測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度成為最小抑菌濃度(mic),一個特定抗菌藥物的測試濃度範圍應該包含能夠檢測細菌的解釋性折點(敏感、中介和耐藥)的濃度,同時也應該包含質控參考菌株的mic.
藥敏試驗的實驗步驟
3樓:十七
普通營養瓊脂培養基:可去生化試劑店購買,做不同細菌的藥敏試驗可選擇不同的培養基,如做大腸桿菌的藥敏試驗可選擇普通營養瓊脂或麥糠凱培養基。做沙門氏菌可選擇血清培養基。
藥敏試紙:購買或自制(詳見實驗準備)
細菌:待做藥敏試驗的細菌
儀器:接種環、酒精燈、打孔器、牛津杯、移液器、滴頭 2.1 藥敏片的準備:購買或自制
2.1.1 製備方法:
取新華1號定性濾紙,用打孔機打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔乾燥的青黴素空瓶中,瓶口以單層牛皮紙包紮。經15磅15-20分鐘高壓消毒後,放在37°C溫箱或烘箱中數天,使完全乾燥。
2.1.2 抗菌藥紙片製作:
在上述含有50片紙片的青黴素瓶內加入藥液0.25毫升,並翻動紙片,使各紙片充分浸透藥液,翻動紙片時不能將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱,放37°C溫箱內過夜,乾燥後即密蓋,如有條件可真空乾燥。
切勿受潮,置陰暗乾燥處存放,有效期3-6個月。
2.2 藥液的製備(用於商品藥的試驗):按商品藥的使用**量的比例配製藥液;如商品藥百病消按其說明量**量0.
01%飲水,可按這個比例配製藥液,可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用於做藥敏試驗的藥液。 3.
1 藥敏片法
3.1.1 在「超淨臺」中,用經(酒精燈)火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物,以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。
具體方式;用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌,以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後,找到第二點劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細菌均勻密佈於平皿。(另:
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密,直接懸液法要把菌液濃度用生理鹽水或pbs調到0.5個麥氏標準再塗布均勻。
)3.1.2 將鑷子於酒精燈火焰滅菌後略停,取藥敏片貼到平皿培養基表面。
為了使藥敏片與培養基緊密相貼,可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結果,要求藥敏片能有規律的分佈於平皿培養基上;一般可在平皿**貼一片,外周可等距離貼若干片(外週一般可貼七片),每種藥敏片的名稱要記住。
3.1.3 將平皿培養基置於37°C溫箱中培養24小時後,觀察效果。
3.2 牛津杯法
3.2.1 在「超淨臺」中,用經(酒精燈)火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物,以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。
具體方式;用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌,以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後,找到第二點劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細菌均勻密佈於平皿。(另:
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密。)
3.2.2 以無菌操作將滅菌的不鏽鋼小管(內徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管,管的兩端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),放置在培養基上,輕輕加壓,使其與培養基接觸無空隙,並在小管處標記各種藥物名稱。
每個平板可放4-6支小管。待分鐘後,分別向各小管中滴加一定數量的各種藥液,勿使其外溢。置37°C培養8-18小時,觀察結果。
3.2.3 將平皿培養基置於37°C溫箱中培養24小時後,觀察效果。
3.3 打孔法:
該法較簡單,成本低,易操作,比較適用於商品藥物的檢測。
3.3.1 在「超淨臺」中,用經(酒精燈)火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物,以劃線方式將細菌塗布到平皿培養基上。
具體方式;用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點塗菌,以每點開始劃線塗菌至平皿的1/2。然後,找到第二點劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細菌均勻密佈於平皿。(另:
可挑取待試細菌於少量生理鹽水中製成細菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液塗布於平皿培養基表面。要求塗布均勻緻密。)
3.3.2 以無菌操作將滅菌的不鏽鋼小管(外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米,管的兩端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),放置在培養基上打孔,將孔中的培養基用針頭挑出,並以火焰封底,使培養基能充分的與平皿融合(以防藥液滲漏,影響結果)。
3.3.3 加樣:按不同藥液加樣,樣品加至滿而不溢為止。
3.3.4 將平皿培養基置於37°C溫箱中培養24小時後,觀察效果。
做藥敏試驗需要什麼
4樓:平哥看
藥敏試驗根據美國臨床標準委員會(nccls)推薦的k-b瓊脂法進行,藥敏紙片選擇中國生物製品鑑定所藥敏紙片,試驗所選擇藥物必須包括下列抗生素:氨苄西林(amp),阿莫西林/克拉維酸(amc),頭孢噻吩(cft),頭孢噻肟(ctx),慶大黴素(gen),萘啶酸(nal),環丙沙星(cip),四環素(tbt),利福平(***),複方新諾明(**z)。藥敏結果判定標準按照nccls手冊2005版。
1. 操作方法:
(1)將待檢菌接種於普通營養瓊脂平板,37°C培養16~18小時,然後挑取普通營養瓊脂平板上的純培養菌落,懸於3ml生理鹽水中,混勻後與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙為背景,調整濁度與比濁管(0.5麥氏單位)相同。
(2)用無菌棉拭子蘸取菌液,在管壁上擠壓去掉多餘菌液。用棉拭子塗布整個m-h培養基表面,反覆幾次,每次將平板旋轉60度,最後沿周邊繞兩圈,保證塗均勻。
(3)待平板上的水分被瓊脂完全吸收後再貼紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在平板表面,紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片,每張紙片間距不少於24mm,紙片中心距平皿邊緣不少於15mm。
在菌接種後15分鐘內貼完紙片。
(4)將平板反轉,孵育18~24小時後取出,用遊標卡尺測量抑菌圈直徑,從平板背面測量最接近的整數毫米數並記錄(附表6)。抑菌環的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現蔓延生長,進入抑菌環,磺胺藥在抑菌環內出現輕微生長,這些都不作為抑菌環的邊緣。
結果判斷依據鑑定所藥敏紙片判定標準。
(5)每次藥敏試驗必須用atcc 25922大腸桿菌做質控。只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許範圍內測試菌株的結果才可以報告。atcc 25922的結果必須與測試菌株同時記錄和報告在附表6中。
0.5麥氏比濁管配製方法:
0.048m bacl2 (1.17% w/v bacl2 . 2h2o) 0.5ml
0.36n h2so4 (1%, v/v) 99.5ml
將二液混合,置螺口試管中,放室溫暗處儲存。用前混勻。有效期為6個月。
2. 注意事項:
(1) 製備mh瓊脂平板應用直徑90mm平皿,在水平的實驗臺上傾注。瓊脂厚為4±0.5mm(約25-30ml培養基),瓊脂凝固後塑料包裝放4°C儲存,在5 日內用完,使用前應在37°C培養箱烤乾平皿表面水滴。
傾注平皿前應用ph計測ph值是否正確(ph應為7.3)。ph過低會導致氨基糖苷類,大環內酯類失效,而青黴素活力增強。
(2) 藥敏紙片長期儲存應於-20°C,日常使用的小量紙片可放在4°C,但應至於含乾燥劑的密封容器內。使用時從低溫取出後,放置平衡到室溫後才可開啟,用完後應立即將紙片放回冰箱內的密封容器內。 過期紙片不能使用, 應棄去。
(3) 不穩定藥物如亞胺培南, 頭孢克洛, 克拉維酸複合藥等, 應冷凍儲存, 最好在-40 °C以下。
(4) 保證質控菌株不變異的簡便方法,將新得到的凍幹菌株接種含血的m-h平板復活。然後每株細菌接種10支高層瓊脂管,放置冰箱儲存。每月取出一支,傳出細菌供常規用。
待用剩至最後一支,可傳種在m-h平板上,再接種一批高層瓊脂管備用。如此可保證原始菌種永不接觸抗菌素。
3.質量控制
質量控制方法 是用與常規實驗相同的操作方法,測定質控菌株的抑菌環。應使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的塗布方法等均同常規操作,測定的抗菌素種類也應與常規測定的種類相同。
細菌藥敏試驗 接種細菌的量怎麼控制?
5樓:歐陽俠
這肯定是有規定的。
具體菌量確實很難保證,但是不需要很精確,測量或觀察菌液的渾濁情況接近0.5個麥氏比濁度即可。
另外用紙片法做藥敏必須使用標準菌株做對照或者說質量控制,標準菌株在相同渾濁度菌液接種後所形成的抑菌環必須適度,否則該試驗不可靠。
如果你想具體瞭解的話就看看《抗微生物藥物敏感性試驗規範》
怎樣利用微生物處理廢水，怎樣利用微生物的生長曲線來控制汙水生物處理構築物的執行
用微生物處理廢水常用生物膜法。所有的汙水處理裝置都有固定的濾料介質如碎石 煤渣及塑料等，在濾料介質的表面覆蓋著一層由各類微生物組成的粘狀物稱為生物膜。生物膜主要是由細菌菌膠團和大量真菌菌絲組成，在表面還棲息著很多原生動物。當汙水通過濾料表面時，生物膜大量地吸附水中各種有機物，同時膜上的微生物群利用溶...
沼氣發酵微生物是怎樣分類的,沼氣發酵微生物的種類有哪些
沼氣發酵微生物是一個統稱，包括髮酵性細菌 產氫產乙酸菌 耗氫產乙酸菌 食氫產甲烷菌 食乙酸產甲烷菌五大類群。這些微生物按照各自的營養需要，起著不同的物質轉化作用。前三類群細菌的活動可使有機物形成各種有機酸，將其統稱為不產甲烷菌 後二類群細菌的活動可使各種有機酸轉化成甲烷，將其統稱為產甲烷菌，沼氣微生...
做微生物時，培養時間超過規定時間，微生物數量會不會增加
這不好說，要看你培養什麼，超時多久，培養基的養分等等。一般情況下超時會導致菌落不純或被自身代謝產物 毒害。細菌的各種生化反應試驗中，接種後的培養時間長短不一是為什麼 微生物的生化試驗是神馬試驗?如果是培養微生物的話,一定的培養時間裡微生物無太大影響,如果培養時間超過一定範圍就會有很大影響.時間太短 ...