1樓:西華學長
凝膠過濾層析中線性和球狀的區別是不同的溶質因不同程度進入介質枯納而在液相中停留的時間不同,凝膠的孔神拆徑和遊敗棗溶質分子不同。
凝膠過濾層析的原理是什麼?
2樓:小小杰小生活
基本原理:凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網狀結構的凝膠的分子篩作用,根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。
層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質,多是交聯的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質,小分子物質能進入其內部,流下時路程較長,而大分子物質卻被排除在外部,下來的路程短,當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時,溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。
凝膠層析的特點:
1)凝膠層析操作簡便,所需裝置簡單。有時只要有一根層析柱便可進行工作。分離介質——凝膠完全不需要像離子交換劑那樣複雜的再生過程便可重複使用。
2)分離效果較好,重複性高。最突出的是樣品**率高,接近100%。
3)分離條件緩和。凝膠骨架親水,分離過程又不涉及化學鍵的變化,所以對分離物的活性沒有不良影響。
4)應用廣泛。適用於各種生化物質,如肽類、激素、蛋白質、多糖、核酸的分離純化、脫鹽、濃縮以及分析測定等。分離的分子量範圍也很寬,如sephadex g類為102-105 d;sepharose類為105-108 d。
以上內容參考:百科-凝膠過濾層析。
凝膠過濾層析的原理是什麼?
3樓:站在太陽下
凝膠過濾層析的原理是利用具有多孔網狀結構的顆粒的分子篩作用,根據被分離樣品中各組分相對分子質量大小的差異進行洗脫分離,主要是根據蛋白質的大小和形狀,即蛋白質的質量進行分離和純化。
凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析,小分子物質能進入其內部,流下時路程較長,而大分子物質卻被排除在外部,下來的路程短,當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時,溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。
凝膠過濾層析原理
4樓:喬彥
凝膠過濾層析原理是利用具有網狀結構的凝膠的分子篩作用,根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。
凝膠過濾層析是一種溶液分離技術,常用於生物化學、分子生物學和生物技術領域中的分離純化和鑑定分子量的方法。它利用具有網狀結構的凝膠的分子篩作用分離樣品中的不同尺寸的物質。
在凝膠過濾層析中,樣品混合物通過乙個具有不同孔徑大小的凝膠層,大分子的樣品被篩選出來,只有小分子樣品能夠穿過凝膠,沿著孔道內流動,進而保留在層析柱的凝膠層不同深度的位置,最判枝塌終實現分離純化的目的。
其他常用的層析方法如樹脂層析,其原理是根據分子之間的相互作用力差異進行分離。例如電荷、親和力、分子大小等,使用不同的樹脂材料可以實現不同物質的純化。
凝膠過濾層析相對於搭帶樹脂層析具有的優點:
1、不需要任何先驗知識,只需瞭解分子量範圍,即可進行分離;
2、應用範圍廣,可用於蛋白、多肽、dna/rna等生物分子的分離和純化;
3、分離過程中不需要應用強流速或衝擊壓力,對生物大分子的生物活性不會造成影響。
因此,凝膠過濾層析是一種十分常用和有效的分離純化方法,已經成為生物分離領域不可缺少的工具之一。
凝膠過濾層析的方法
1、準備凝膠填料:選擇合適的凝膠填料,例如sephadex等,按照說明書進行膨脹、洗滌等處理。
2、製備洗脫緩衝液:根據需要進行緩衝液的配製,與凝膠填料相匹配。
3、樣品處理:將需要純化的樣品按照要求進行預處理,如ph調整、去除雜質、濾清等。
4、層析柱掘圓裝載:將處理好的樣品加入均勻膨脹的凝膠填料糖球中,在層析柱上均勻填充。
凝膠過濾層析的基本原理
5樓:浮世繪半闕浮華
凝膠過濾層析又稱為排阻層析或分子篩方法。其基本原理是利用被分離物質分子大小不同及固定相(凝膠)具有分子篩的特點,將被分離物質各成分按分子大小分開,達到分離的目的。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質,多是交聯的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質,小分子物質能進入其內部,流下時路程較長,而大分子物質卻被排除在外部,下來的路程短,當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時,溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。
它的突出優點是層析所用的凝膠屬於惰性載體,不帶電荷,吸附力弱,操作條件比較溫和,可在相當廣的溫度範圍下進行,不需要有機溶劑,並且對分離成分理化性質的保持有獨到之處。對於高分子物質有很好的分離效果。
凝膠過濾層析的凝膠層析的應用
6樓:冥界煙花
⑴脫鹽:高分子(如蛋白質、核酸、多糖等)溶液中的低分子量雜質,可以用凝膠層析法除去,這一操作稱為脫鹽。本法脫鹽操作簡便、快速、蛋白質和酶類等在脫鹽過程中不易變性。
適用的凝膠為sephadexg或bio-gel-p.柱長與直徑之比為5-15,樣品體積可達柱床體積的25%-30%,為了防止蛋白質脫鹽後溶解度降低會形成沉澱吸附於柱上,一般用醋酸銨等揮發性鹽類緩衝液使層析柱平衡,然後加入樣品,再用同樣緩衝液洗脫,收集的洗脫液用冷凍乾燥法除去揮發性鹽類。
用於分離提純:凝膠層析法已廣泛用於酶、蛋白質、氨基酸、多糖、激素、生物鹼等物質的分離提純。凝膠對熱原有較強的吸附力,可用來去除無離子水中的致熱原製備注射用水。
測定高分子物質的分子量:用一系列已知分子量的標準品放入同一凝膠柱內,在同一條件下層析,記錄每一分鐘成分的洗脫體積,並以洗脫體積對分子量的對數作圖,在一定分子量範圍內可得一直線,即分子量的標準曲線。測定未知物質的分子量時,可將此樣品加在測定了標準曲線的凝膠柱內洗脫後,根據物質的洗脫體積,在標準曲線上查出它的的分子量。
高分子溶液的濃縮:通常將sephadexg-25或50幹膠投入到稀的高分子溶液中,這時水分和低分子量的物質就會進入凝膠粒子內部的孔隙中,而高分子物質則排阻在凝膠顆粒之外,再經離心或過濾,將溶脹的凝膠分離出去,就得到了濃縮的高分子溶液。
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