1樓:匿名使用者
。。。你這問題問的,都夠寫一套叢書了。。。
原核表達載體和真核表達載體的區別
2樓:威海博銳化機
一、表達載體不同:
原核表達載體構建重組表達載體:
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳後,用膠**kit或凍融法**載體大片段。
2、pcr產物雙酶切後**,在t4dna連線酶作用下連線入載體。
真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
二、表達實現方式不同:
真核表達載體具有neo基因,可以採用g418來篩選已成功轉染了該載體的靶細胞。這些特殊的結構可以實現目的基因在靶細胞內的穩定表達。
三、獲得目的基因方式不同:
pegfp-n1載體從結構上看,質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
原核表達載體獲得目的基因:
1、通過pcr方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。
2、通過rt-pcr方法:提取總rna,以mrna為模板,逆轉錄形成cdna第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行pcr迴圈獲得產物。
3樓:匿名使用者
原核載體可以將真核基因表達,但是表達出來的蛋白是沒有活性的,因為缺少翻譯後修飾系統。。。真核的表達載體呢 由於比較大 不適合大量快速擴增,所以要在其載體上構建可以在原核生物 如大腸桿菌中複製的所需的複製原件 。。。。綜上 在應用的時候 要構建 穿梭質粒 可以穿梭於 原核和 真核 呵呵 還有就是 原核表達載體的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。
總覺得不夠正確答案 。。。。。有些人緣的蛋白在原核裡沒有蛋白翻譯後修飾,表達後沒有活性,這時候就得在真核裡表......
4樓:匿名使用者
主要是因為原核和真核表達系統所需的表達元件不同。
比如說啟動子,終止子在兩種表達系統中是不一樣的。
帶有真核表達元件的是真核載體,能在真核生物內表達;
帶有原核表達元件的是原核載體,能在原核生物內表達。
兩者都具有的為穿梭載體。
1)真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一般都帶有能在真核生物或原核生物中表達的必需表達元件;
2)真核表達和原核表達的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的表達產物,最好有生物活性,以便下一步的實驗需要.
3)原核表達載體一般只能在原核生物中表達外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達它們的表達元件.
真核過表達質粒,原核過表達質粒的區別~急求~~
5樓:學雅思
一、指代不同
1、真核過表達質粒:真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
2、原核過表達質粒:能攜帶插入的外源核酸序列進入原核細胞中進行表達的載體。
二、特性不同
1、真核過表達質粒:該質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
2、原核過表達質粒:啟動子是dna鏈上一段能與rna聚合酶結合並起始rna合成的序列,它是基因表達不可缺少的重要調控序列。沒有啟動子,基因就不能轉錄。
由於細菌rna聚合酶不能識別真核基因的啟動子,因此原核表達載體所用的啟動子必須是原核啟動子。
三、載體構建不同
1、真核過表達質粒:,由238個氨基酸組成,分子量約為27kd。gfpgfp在包括熱、極端ph和化學變性劑等苛刻條件下都很穩定,用甲醛固定後會持續發出熒光,但在還原環境下熒光會很快熄滅。
2、原核過表達質粒:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。
6樓:匿名使用者
質粒只是小型環狀dna分子,你指的真核、原核具體是什麼?
質粒圖譜怎麼看
7樓:匿名使用者
第一步:首先看ori的位置,瞭解質粒的型別(原核/真核/穿梭質粒)
ori的箭頭指複製方向,其他元件標註的箭頭多指轉錄方向(正向)。
第二步:再看篩選標記,如抗性,決定使用什麼篩選標記:
(1)ampr:水解β-內醯胺環,解除氨苄的毒性。
(2)tetr :可以阻止四環素進入細胞。
(3)camr:生成氯黴素羥乙醯基衍生物,使之失去毒性。
(4)neor(kanr):氨基糖苷磷酸轉移酶,使g418(卡那黴素衍生物)失活。
(5)hygr:使潮黴素β失活。
第三步:看多克隆位點(mcs)。它具有多個限制酶的單一切點,便於外源基因的插入。
如果在這些位點外有外源基因的插入,會導致某種標誌基因的失活,而便於篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步:再看外源dna插入片段大小。質粒一般只能容納小於10kb的外源dn**段。一般來說,外源dn**段越長,越難插入,越不穩定,轉化效率越低。
第五步:是否含有表達系統元件,即啟動子-核糖體結合位點-克隆位點-轉錄終止訊號。這是用來區別克隆載體與表達載體。
克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用那種載體,還是要以實驗目的為準繩。
真核表達載體的特點,原核表達載體的特點
8樓:匿名使用者
原核表達一般週期短,但蛋白的活性不能確定
真核表達經過糖基化,磷酸化,和目的蛋白相似性高,週期要長,往往有的還有養細胞
請問現在原核表達質粒載體(比如pet載體)的價位大約是多少?可以去那些公司購買呢?
9樓:百優生物
第一個,你可以找copy一找你的師兄弟有沒bai有,du再找一找同學有沒有?zhi如果有的話就省了這dao筆錢。
或者用你們手頭現有的質粒去換。
如果沒有,可以找一些國內的公司去買,因為一些不好明說的原因,國內一些公司也有一些。這樣會便宜一些。
如果放心不下,那就如樓上說的,去merck/novagen公司購買,當然這**就高一些,估計在幾千塊錢吧,不同質粒**不一樣。
10樓:匿名使用者
pet系列載體可以去merck/novagen公司購買http://****merck-chemicals.
***.**/life-science-research/pet/chinese/c_2tob.s1okacaaaejwhl9.
zlx具體**要詢問你回
當地的**答商
11樓:德元
北京德元國際科技****
已知氨基酸序列怎麼構建原核質粒
真核生物中分離到的完整的基因片段與表達載體構成的重組質粒轉化入大腸桿菌後,不能獲得表達的原因?
12樓:匿名使用者
大腸桿菌為原核生物,原核生物的基因序列中不含有內含子,也就沒有內含子的剪下機制,而真核生物中獲得的完整的基因片段中一定是含有內含子的,(mrna中不含)所以,在表達上會有差異。
13樓:匿名使用者
你用的是什麼載體?
如果想讓其蛋白質在大腸桿菌中大量表達 用原核表達載體比較好
14樓:匿名使用者
大腸桿菌是原核生物。不能合成真核生物的蛋白質,往這方面想
原核載體與真核載體,原核表達載體和真核表達載體的區別
主要是因為原抄核和真核表達襲系統所需的表達元件不同。比如說啟動子,終止子在兩種表達系統中是不一樣的。帶有真核表達元件的是真核載體,能在真核生物內表達 帶有原核表達元件的是原核載體,能在原核生物內表達。兩者都具有的為穿梭載體。1 真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一...
真核表達載體的特點,原核表達載體的特點
原核表達一般週期短,但蛋白的活性不能確定 真核表達經過糖基化,磷酸化,和目的蛋白相似性高,週期要長,往往有的還有養細胞 真核過表達質粒,原核過表達質粒的區別 急求 一 指代不同 1 真核過表達質粒 真核細胞表達載體之一為pegfp n1載體,具有對方面的優點。pegfp n1載體上攜帶有egfp蛋白...
逆轉錄病毒表達載體質粒是否可做普通質粒使用
不可以,逆 bai轉錄病毒載體與普通質粒 du載體區zhi 別很大。第一dao 二者遺傳物質不同,專這也導致了你合屬 成的鏈需要與載體遺傳物質相適應。第二,質粒可用於大部分細菌,真核質粒可用於部分酵母,逆病毒載體的選擇性要強一些,不同的病毒可用於不同型別的細胞。第三,逆轉錄病毒載體是感染細胞以匯入雜...