1樓:
1、瞭解採集土樣的要求和方法。
2、掌握由土壤中分離稀有放線菌的基本原理和操作技術。
3、學習並掌握土壤稀釋法和微生物的純培養技術。
4、學習並掌握抗生菌的鑑別方法。
二、原理
篩選放線菌是新抗研究的重要課題之一。迄今為止,已發現的抗生素有80%皆來自於放線菌。放線菌主要存在於土壤中,並在土壤中佔有相當大的比例。
一般地,放線菌在比較乾燥、偏鹼性、含有機質豐富的土壤中數量居多。通常,隨著地理分佈、植被及土壤性質的不同,放線菌的種類、數量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本營,其中的放線菌多以鏈黴菌為主,因此人們通常將除鏈黴菌以外的其它放線菌統稱為稀有放線菌。
若以常規方法進行分離,得到的幾乎全部是鏈黴菌。然而,當採用加熱處理土樣、選用特殊培養基或新增某種抗生素等方法時,均可提高稀有放線菌的獲得率。由土壤中分離放線菌的方法很多,其中包括稀釋法、彈土法、混土法和噴土法等,本實驗主要採用稀釋法,並通過選用特殊培養基的方法,來獲得少量稀有放線菌。
由土壤中分出的放線菌需進一步鑑別是否為需要的抗生菌。首先應根據篩選目的確定試驗模型,然後利用培養基平板進行拮抗性測定。常用的方法有瓊脂塊法和濾紙片法。
其主要依據是擴散原理,即觀察在抗生菌周圍是否會出現明顯的抑菌圈。抑菌圈的大小和透明度則表明了該菌株抗菌活性的強弱。本實驗選用了這兩種方法。
三、實驗材料
1、培養基:葡萄糖天門冬素瓊脂,精氨酸瓊脂,高氏1號瓊脂,以上每種培養基皆用500ml三角瓶分裝250ml。
2、滅菌物品:牛皮紙袋,培養皿,1ml、5ml吸管,250ml三角瓶分裝90ml無菌水(含30粒玻璃珠),18×180mm試管分裝9ml無菌水,牙籤,玻璃刮鏟,18×180mm試管中分裝10 ml 1‰k2cr2o7母液。
3、試驗菌:
(1)枯草芽孢桿菌(bacillus subtilis)
(2)大腸桿菌(escherichia coli)
(3)金黃色葡萄球菌(staphlococcus aureus)
(4)深紅酵母(ruodotorula rubra)
4、其它:採土鏟,細目篩,藥勺,稱量紙,試管架,小天平,記號筆,打孔器,遊標卡尺、鑷子,圓濾紙片,15×150mm試管分裝5ml無菌水,1ml吸管,無菌漏斗。
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